202212. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminósav-származékok előállítására

15

HU 202 212 B

16

Vizsgált vegyület

IC* (mól)

(14)

4,8 x 10-8

(15)

3,3 x 10*

(16)

3,8x10*

(17)

3,3 x 10*

(18)

3,0 xia8

(19)

4,8 x 10*

(20)

7,0 xia8

(21)

4,3 x 10-8

(22)

6,3 x 10-8

(23)

4,0 xia9

(24)

8,9 x 10*

(25)

1,4 x ío*

(26)

2,4 x 10-8

(27)

4,6 xia8

(28)

4,4 x 10*

(29)

1,6 xio*

(30)

6,4 x IO-9

(31)

1,3 x 10-8

(32)

1,5 x 10-8

(33)

1,7 x 10*

(34)

7,5 xlO-9

(35)

5,3 x 1a9

(36)

9,8 x 10*

(37)

3,8 xlO-8

(38)

4,4 x 10-8

(39)

3,7 x 10*

(40)

5,7 x 1a8

2. Tesztvizsgálat

Tesztvizsgálád módszer

Hím vagy nőstény 2,5-3,5 kg-os majmokat (Macaca fascicularis) alkalmazunk. A tesztvizsgálatnak alávetett vegyület adagolása előtt egy nappal szubkután 15 mg/kg és 30 perccel intravénásán 10 mg/kg furosemidet adagolunk az állatoknak és nátrium kiürülést idézünk elő.

A vizsgált vegyületet híg ekvimoláris sósavban (pH 5-6) oldjuk és orálisan adagoljuk a tudatos és idomított majmoknak, akiket leszíjazva székbe ültetünk és pneumatikus mérővel a karjuk körül az átlagos artériás vérnyomást mérjük (Model BP-203 NPJ, Nippon Colin) (MAP).

A MAP áléket a vizsgált vegyület adagolása után 0 (előzetes mérés alapvonal), 0,5; 1; 2; 3; 4 és 6 órával mérjük. A maximális vérnyomáscsökkentő hatást a kezelés előtti értékhez képest maximális MAP csökkenésből számoljuk.

A dózisadagolás után 0, 0,5; 1; 2; 4 és 6 órával vérmintát veszünk a majmok könyökhajlati vénájából EDTA dinátrium sóval borított kémcsövekbe, ezt 10 percig centrifugáljuk (3000 ford/perc, 4 *C) és plazmát nyerünk a plazma renin aktivitás meghatározásához (PRA). A PR A értéket az 1. tesztvizsgálat eljárása szerint az Ang I képződési sebességével mérjük. 100 mikroliter plazmát elegyítünk 100 mikroliter angiotcnsináz inhibitorokkal (3 mmól 8-hidroxi-kinolin-szulfát és 5 mmól 23-dimerkapto-propanol, SB-REN-1, SORIN, BIOMEDICA, Italy). Az elegy felét (100 mikroliter) egy óráig 37 *C-on inkubáljuk és a keletkezett Ang I mennyiségét meghatározzuk kereskedelmi radioimmun készlettel; RIA (DINABOTT). A maradék másik rész (100 mikroliter) reakcióelegyetegy óráig 4 *C-on tartjuk és a plazmában levő előzetes Ang I mennyiségét mérjük

és korrigáljuk. A PRA százalékos inhibiálását az alábbi

összefüggés segítségével számítjuk:

D37-D4

Inhibiálás % = (1----------------) x 100

A37-A4

A37:A képződött angiotensin I mennyisége 37 *C-os inkubálás mellett a dózisadagolás előtt kapott plazmában.

A«: A képződött angiotensin I mennyisége 4 ‘C-on tartott dózisadagolás előtt nyert plazmában.

D37: A képződött angiotensin I mennyisége 37 *C-os inkubálás mellett a dózis adagolása után kapott plazmában.

D4: A képződött angiotensin I mennyisége 4 'C-on tárolt a dózisadagolás után nyert plazmában

Tesztvizsgálati eredmények

Vizsgált

vegyület

Dózis

(mg/kg/po)

Max.

vérnyomáscsökkentés

%

Max. PRA inhibiálás %

(5)

32

18

92

(23)

3,2

19

99

(24)

3,2

15

93

A találmány szerinti eljárást az (I) általános képletű vegyületek előállítására az alábbi előállításokban és példákban részletesen bemutatjuk. Az előállításokban és példákban vékonyréteg-kromatográfiás lapként Kiesel-gél 60F 254 (Merck and Co.) vastagság: 0,25 mm) lapokat alkalmazunk.

1. előállítás

1,02 g N-(t-butoxi-karbonil)-N-metil-B-alanin és 0,48 g morfolin száraz diklórmetánban készült elegyéhez 1,05 g N-etil-N’-(3-(dimetil-ammo)-propil)-karbodiimid hidrokloridot adunk és a reakcióelegyet éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot etilacetátban oldjuk. Az oldatot 1%-os vizes citromsavval, telített nátrium-hidtogén-karbonát oldattal, majd telített sóoldattal mossuk, majd magnézium-szulfáton megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. 1,36 g 4-N-(t-butoxi-karbonil)-N-metil-béta-alanin-morfolint kapunk.

Rf: 0,57 (metanol/kloroform, 10 térf/térf%)

2. előállítás

1,37 g 4-[N-(t-butoxi-karbonil)-N-metil-béta-alanin]-morfolin 20 ml trifluor-ecetsavban készült oldatát 1 óráig 0 *C-on keverjük, majd az oldószert elpárologtatjuk és 1,44 g 4-(N-metil-béta-alanil>morfolin trifluor-ecetsavas sót kapunk.

Rf: 0,17 (kloroform: metanol: ecetsav, 8:1:1, tf/tf)

3. előállítás

Az 1. előállítás eljárása szerint az alábbi vegyületeket állítjuk elő.

(1) 4-[N-(t-butoxi-karbonil)-N-metil-béta-alanil]-üomorfolint (798 mg) 610 mg N-(t-butoxi-karbonil>N-metil-béta-alaninból és 372 mg tiomorfolinból kiindulva.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9