202117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növekedést serkentő hormon stabilitására és stabilizált hormonkészítmény előállítására
HU 202117B hormont. A szakemberek előtt nyilvánvaló, hogy a szilárd állapotú készítmények magas tömegszázalékban tartalmazhatják a növekedési hormont, minthogy nincs szükség a vízre vagy vizes oldóközegre, mint az injektálható készítmények esetében. A találmányban alkalmazott növekedési hormonokhoz úgy juthatunk hozzá, hogy a különféle állatok agyalapi mirigyét extraháljuk és a kivonatot betöményítjük. Ugyancsak használhatók azok a növekedési hormonok, amit DNS rekombináns technikával állítottak elő. A találmányban felhasznált hormonok aminosavsorrendje ismert. így például a humán növekedésserkentő hormon aminosavsorrendjét C.H.Li ismerteti a Kirk-Othmer szerkesztette „Encyclopedia of chemical technology’’-ban (3. kiadás, 12. kötet, 549-552. oldal). A borjú növekedési hormon aminosavsorrendjét R.P. Woychik írja le [Nucleic Acid. Res., 10,7197( 1982)]. Az aminosavsorrendet a juh növekedési hormonjánál CH.Li és munkatársai [Arch.Biochem. Biophys., 156 493-508 (1973)], a sertés növekedési hormonjánál P.H, Seeburg és munkatársa [DNA., 2, 37 45 (1983)] ismertetik. A fentieken kívül felhasználhatjuk azokat a növekedési hormonokat is, melyek maximum 12 aminosawal rövidebbek a fehérje amino-végétől számítva. A találmányban alkalmazott stabilizátorok általában két jellemző tulajdonsággal rendelkeznek. Először, általában erősen polárisak, másodszor, jól kell oldódjanak vizes közegben. Az egyik kivitelezési mód szerint a stabilizátort előny8s olyan mennyiségben alkalmazni, hogy ha a készítmény vizes közegben vagy oldatban van, az oldat telítve legyen a stabilizá torral. Nyilvánvaló, hogy az egyes stabilizátoroknak különböző oldékonyságuk van, így a készítményekben különböző mennyiségben lehetnek jelen. Ha a növekedésserkentő készítmény vizes közegben diszpergált vagy oldott állapotban van. a stabilizátort 5 tömegszázaléktól a telítési koncentrációig tartalmazhatja. Szilárd készítménynél a stabilizátor nagyobb tömegszázalékban is szerepelhet, minthogy nincs jelen a főtömeget kitevő víz vagy vizes oldószer. Az alább felsorolt egyes stabilizátorok százalékos mennyisége a stabilizátort és a növekedésserkentő hormont tartalmazó készítmény vizes közegű és szilárd állapotú kivitelezési formájára egyaránt vonatkozik. A találmányban alkalmazott stabilizátorok lehetnek poliolok, nevezetesen nem-redukáló cukrok, cukoralkoholok, cukorsavak, laktóz, pentaeritrol, vízoldékony dextránok és Ficoll. Nem-rdukáló cukorra példaként a szaccharózt; cukoralkoholokra a mannitolt, xilitolt, eritritolt, treitolt, szorbitolt és a glicerint; cukorsavakra az L-glükonsavat és fémsóit említhetjük. Előnyös poliol a xilitol. Szemben azzal, amit az előző közlemények és különösen a4439181 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás elolvasása után hihetnénk, nem alkalmas valamennyi poliol a növekedésserkentő hormonok stabilizálására. Amíg sok polimer csökkentheti ugyan a csapadékképződést, vannak olyanok, amelyek az oldott növekedési hormon bioaktivitását nem védik. Ilyen poliolok például a redukáló cukrok, mint amilyen a fruktóz, mannóz és a maltóz. A laktóz, ami 3 redukáló cukor, úgy látszik kivételt képez. Nyilvánvaló, hogy a találmányban alkalmazható poliolok vízoldékonysága különböző. A poliol 2,5-99 súlyszázalékban lehet jelen, mint stabilizáló mennyiség, a készítményben a vizes közegbe való bejuttatás előtt. A poliol stabilizátort előnyösen 15-60 tömegszázalékban tartalmazza a készítmény. A találmány szerinti másik alkalmas atabilizátorok bizonyos aminosavak. Felhasználható aminosav például a glicin, szakorzin, lizin vagy sói, szerin, arginin vagy sói, bétáin, N,N-dimetil-glicin, aszparaginsav vagy sói, glutaminsav vagy sói. Az aminosavak keverékét is alkalmazhatjuk. Előnyös aminosav a szarkozin. Az aminosavak stabilizátorként 2,5-99 tömegszázalékban lehetnek a készítményben a vizes közegbe való bejuttatás előtt. Az aminosav stabilizátort előnyösen 15-60 tömegszázalékban tartalmazza a készítmény. Úgy találtuk, hogy az aminosavak bizonyos polimerjei alkalmas növekedési hormon stabüizálók. Ezek a poliaminsavak vagy sóik jellemzően olyan oldalcsoportokat hordoznak, melyek fiziológiás kémhatásnál elektromosan töltöttek. A töltés lehet pozitív vagy negatív is. Ilyen poliaminosavak például a polilizin, poliaszparaginsav, poliglutaminsav, poliarginin, polihisztidin, poliomitin és ezek sói. Előnyös poüaminosavsó a poli-DL-lizin-hidrobromid. A poliaminosavak 2,5-99 tömegszázalékban lehetnek jelen, mint stabilizátorok a készítményben; előnyösen mennyiségük a 15-60 tömegszázalék. Az alkalmas stabüizátorok egy másik csoportját képezik a kolinszármazékok. Példaként említhetjük a kolin-kloridot, kolin-dihidrogén-citrátot, kolinhidrogén-tartarátot, kolin-aszkorbátot, kolin-borátot, kolin-glükonátot, kolin-foszfátot, di(kolin)szulfátot és a dikolin-mukátot. Előnyös kolinszármazék a kolin-klorid. A kolinszármazékok stabilizátorként 2,5-99 tömegszázalékban vannak jelen a készí tményben a vizes közegbe való bejuttatás előtt; előnyös mennyiségük 15-60 tömegszázalék. A stabilizátorból és a növekedési hormonból álló stabilizált készítményt egyszerűen előállíthatjuk úgy, hogy a komponenseket mechanikusan összekeverjük. Ha a stabilizált növekedésserken tő-készítményt injektálható formában akarjuk elkészíteni, a stabilizátort először egy vizes oldatban diszpergáljuk és kevertetjük vagy rázatjuk, hogy a gyorsabb oldódást elősegítsük. Miután a stabilizátor feloldódott, hozzáadjuk az oldathoz a hormont. A vizes oldatból vagy a vízből csak annyi mennyiséget használunk, mai ahhoz kell, hogy a stabüizátor és a növekedési hormon feloldódjon és, hogy egy injektálható készítményhez jussunk. Ehhez 40-90 tömegszázaléknyi oldószer szükséges. Noha előnyös a fenti eljárást alkalmazni, a komponensek adagolásának sorrendjét megváltoztathatjuk, és ez a találmány oltalmi körét nem korlátozza. Egy másik kivitelezési módnál a stabilizátort és a növekedési hormont nedvesen vagy szárazon összekeverjük, szüárd készítményt nyerve, ami különösen alkalmas beültetésre. Miután a növekedési hormont és a stabüizátort összekevertük, további adalékanyagokat, például puffereket, sókat, hatásnövelő anyagokat stb. is adhatunk a készítményhez. 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
