202034. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetraploid és biszabololdús kamilla populációk előállítására
1 HU 202034 B 2 Analízis Éterikus olaj: 1020 mg % Kamazulén: 173 mg % (-)-a-biszabolol: 418 mg %. 5 5. példa Kamilla gyógyáruból kivonat előállítása. A gyógyáru előállításához használt kamillavirágokat az 1. példa szerint abban az időben aratjuk, amikor a csővirágoknak 30-70%-a ki nyílva, és a 10 learatott virágfejeket 50 °C-nál nem magasabb hőmérsékleten szárítjuk. Az így nyert, 105 mg % kamazulént és 212 mg% (-)-a-biszabololt tartalmazó kamilla gyógyáru 400 g mennyiségét 2100 g vizes etanolla (40 tömegszázalék 15 etanol) egy vályús keverőben, a keverő szerkezet percenkénti 30 fordulata mellett 3 óra hosszan extraháljuk. A gyógyáru anyagot ezt követően lepréseljük és az extraktumot szűrjük. A kivonatban a hatóanyag tartalmat az ismert 20 módon határozzuk meg. Kamazulén: 3,7 mg % (-)-a-biszabolol: 10,2 mg % 6. példa 25 Extraktum, illetve kivonat előállítása friss kamillából. Az 1. példa szerint olyan időben aratott kamillavirágokból, amely időben a csővirágoknak 30-70%-a már ki van nyílva (víztartalom 74 %) 758 g friss ka- 30 millavirágot 510 g etanollal (84 tömegszázalék) egy vályús keverőben összekeverünk. Keverés közben a keverő szerkezet percenkénti fordulatszáma 65 és a keverékből 30 percig extrahálást végzünk. Ezután a gyógyárú anyagot kisajtoljuk és az extraktumot szűrjük. 35 Az extraktumban levő hatóanyag mennyiségét ismert módon határozzuk meg. Kamazulén: 11,7 mg % (-)-ct-biszabolol: 16,3 mg % 40 7. példa Éterikus kamillaolaj előállítása Körülbelül 50 “C hőmérsékleten a napfény kizárásával szárított, az 1. példa szerinti nyert száraz kamillavirágból 200 g mennyiséget egy 5-literes 45 gömbedényben 3,6 1 vízzel és 2 g nátrium-aszkorbáttal keverünk össze. A keveréket 1 n HCl-dal 5,0 pH értékűre állítjuk be. A keveréket horzsakő hozzáadása után forrásig melegítjük. Körülbelül 3 órán belül körülbelül 1,2 1 desztillátumot fogunk fel. 50 A desztilláció befejezése után a desztillátumot háromszor 100-100 ml petroléterrel összerázzuk és vízmentes nátriumszulfáton keresztül szárítjuk. A szárított oldatot szűrjük és ezt követően az oldószert forgó elpárologtatóban ledesztilláljuk. 55 Ezután a kapott éterikus olajban levő kamazulén és (-)-a-biszabolol tartalmat meghatározzuk. A nyert anyag: 1,44 g éterikus olaj és ebben Kamazulén: 3,6 % (-)-a-biszabolol: 10,2 %. 60 A fiiggelék Éterikus olaj nyerése A kiinduló anyag egy a találmány szerinti kamillából előállított gyógyárú. A gyógyárú előállításához 65 csak azokat a virágfejeket használjuk, amelyeknél a csővirágoknak 30-70%-a, előnyösen 40-60%-a ki van nyílva. A szárítás szárítószekrényben, 40 "C hőmérsékleten 72 óráig történik. A kamillavirágok éterikus olaját a következőkben ismertetett módon, a gyógyárú kétórás vízgőz desztillációja révén nyerjük. Az aprítatlan gyógyáruból 2,0 g mennyiséget egy literes gömbedényben 250 ml sótalanított vízbe keverünk és ezt egy Clevenger berendezésben (vízgőz desztillációs visszaáramoltatásos berendezés éterikus olaj kis mennyiségének meghatározásához) két órás visszaáramoltatásos desztillációnak vetjük alá. Mintaként analízisként 1 ml pentán szolgál. A visszaáramlási sebesség percenként 40± 4 csepp. A desztillálás befejezése után a pentában oldott éterikus olajat lehetőleg vízmentesen reagensüvegbe eresztjük le és az esetleg a berendezés falára tapadt, visszamaradó éterikus olajat pentánnal kiöblítjük. Az esetleges vízmaradékok eltávolítására az oldathoz egy késcsúcsnyi szárított Na2S04-ot adagolunk és ezután az oldatot zsugorított üvegszűrőn leszűrjük. A zsugorított üvegszűrő D 3 vagy D 4 porozitású. A pentánnak vízfürdőben 40 °C hőmérsékleten való elpárologtatása és exszikkátorban való utószárítás után az olajmennyiséget gravimetikusan meghatározzuk. Az így kapott olajban (körülbelül 20 mg) azután meghatározzuk a kamazulén és a biszabolol tartalmat. A kamazulén spektrofotometriás meghatározása Mérőoldat: Mérőkészülék: A 2 g gyógyáruból az előzőekben ismertetett módon nyert összes (körülbelül 20 mg) éterikus olajat 25 ml n-hexánban vagy ciklohexánban oldjuk. Szűrőfotométer (például Eppendorf) 578 nm 1 cm 20,8 n-hexán vagy ciklohexán Hullámhossz: Küvetta: A kamazulén fajlagos extinkciója (1 g/100 ml; 1 cm): Kiegyenlítő folyadék: A talált kamazuléntartalom mg/100 g-ban: 120 E578 Ha a méréshez nem áll rendelkezésre szűrős fotométer, akkor a meghatározás végrehajtható spektro fotométerrel is: Mérőkészülék: Spektrofotométer (például PM Q II vagy PM Q III, „ZEISS” fék) Hullámhossz: 605 nm Küvetta: 1 cm A kamazulén fajlagos extrakciója (1 g/100 ml; 1 cm): 24,5 Kiegyenlítő folyadék: n-hexán vagy ciklohexán A talált kamazuléntartalom mg/100 g-ban: 102 E<505 Ezt követően határozzuk meg a mérőoldatban levő biszabololt. 14
