202034. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetraploid és biszabololdús kamilla populációk előállítására

1

HU 202034 B

2

A biszabololnak és a maradó biszaboloidnak gázkromatográfiás meghatározása

Gázkromatográf:

Detektor:

Anyagszállító gáz:

Kolonna:

Kolonnatöltés:

Hőmérséklet:

Befecskendezőb

lokk:

Kolonna:

A hőmérséklet programozása: Mintaoldat:

Összehasonlító

oldat:

Befecskendezett

mennyiség:

Kiértékelés:

Biszabolol tartalom:

(mg/100 g

Hewlett Packard Modell 5750, Erba Fractovap 2350 vagy hasonló készülék Lángionizációs detektor Hélium

3,175 mm; 200 cm; acél 3% nitrilszilikongumi „XE 60” kovaföldön szilánozva „Chromosorb WAW HP” 125-150 |im hordozóanyagként Detektor. 320 °C

220 °C

85-220 °C

4 “C/perc

A kamazulénhez való mérőoldattal rokon

Körülbelül 15 mg standard biszabolol van körülbelül 25 ml ciklohexánban oldva A mintaoldatból és az összehasonlító oldatból 5-5 pl A kiértékelés felületösszehasonlítással történik

10 x bemérés (összehasonlítás) (mg)

felületjminta)

felület (összehasonlító)

gyógyáru)

A maradó biszaboloidok meghatározása szintén gázkromatográfiai módszerrel, például a következő felvételi feltételek között végezhető:

Készülék:

Kolonna:

Töltés:

Anyagszállító gáz: A hőmérséklet programozása: Befecskendező/detektor hőmérséklet: Detektor: Befecskendezett mennyiség:

Packard, modell 7721, sorozat

800, illetve Erba Fractovap,

sorozat 2350

Üveg kolonna, 3 m,

átmérő 2 mm, illetve 2 m,

átmérő 2 mm

3% metil-fenil-szilikongumi

„OV 1” kovaföldön szilánozva

"Gaschrom Q” 125-150 pm

hordozóanyagként

N2, 30 ml/perc

80 és 180 °C között

2,5 (3) "C/perc

200 °C

Lángionizációs detektor A például 1:50 arányban hígított éterikus olajból körülbelül 2 pl A kiértékelés részben belső etanol nélkül, részben belső etalonnal történik. Belső etalonként alkalmasak a laurinsav-metil-észter vagy hexadekán a kamazulénszegény, illetve kamazrrlénmentes olajokhoz. Az 5% fölötti kamazuléntartalmú olajoknál ez a belső etalonként használható, amely esetben a tartalmi meghatározás fotometrikusan (578 nm-nél) történik.

SZABADALMI IGÉNYPONT

Eljárás új tetraploid és biszabololdús kamilla populációk előállítására, amelyek a valódi kamillák

(Chamomilla recutita (L.) Rauschen, szinonim, nevén Matricaria Chamomilla L., Asteraceae) kultúrnövényfaj csoportjába tartoznak, és amelyekben a 40 'C hőmérsékleten szárított virágok szárazanyagtartalmára 5 vonatkoztatva legalább 100 mg% kamazulén, legalább 200 mg % (-)-a-biszabolol, és 50 mg %-nál kevesebb további biszaboloid van, a hatóanyagra való szelektálással és adott esetben tetraploidizálással, azzal jellemezve, hogy egy diploid vagy tetraploid kamilla 10 populáció - lavéve a DEGUMILL fajtanevű diploid kamillát - 1000 és 10 000 közötti számú növényegyedeiben, mindenkor az éterikus olajban meghatározzuk az (-)-a-biszabolol-tartalmat és kiszelektáljuk azokat a kamilla növényeket, amelyeknek 40 °C 15 hőmérsékleten szántott virágai legalább 100 mg % kamazulént, legalább 50-100 mg % (-)-a-biszabololt és 50 mg %-nál kevesebb további biszaboloidot tartalmaznak, ezeket a kamillanövényeket a kiinduló populációból különválasztva továbbszaporítjuk és 20 A. ezekből a növényekből legalább 10 egyedet kiszelektálunk, amelyek egyidejű virágzási időt, 20 és 40 mm közötti virágfej nagyságot és a szárazanyag-tartalomra vonatkoztatva legalább 100 mg % kamazulén, legalább 200 mg % biszabolol és keve- 25 sebb, mint 50 mg % további biszaboloid hatóanyagtartalmat mutatnak, és adott esetben ezt követően az így kiszelektált diploid vagy tetraploid növényeket klónoljuk, amely ldónolást vagy

30 a) dugványos szaporítással végezzük, oly módon, hogy a növényeket visszavágjuk, 12 és 14 °C közötti hőmérsékleten újrahajtatjuk és az így nyert rövidhajtásokat magas relatív légnedvesség mellett és 12-18 "C léghőmérsékleten tőzeg-homok-föld keverékbe ül- 35 tetve gyökereztetjük, vagy

b) merisztéma szaporítással végezzük oly módon, hogy osztódásképes szövetrészeket, így például hajtáscsúcsokat vagy hónaljrügyeket 15 "C és 30 °C közötti hőmérsékleten erre szokásos tápanyagban ke- 40 zelünk, úgy, hogy járulékos szervek (járulékos rügyek, hajtások, gyökerek) képződnek, mimellett ezt a szaporítást kívánt esetben tápközegben többször is megismételjük, illetve csak egy táptalajban végezzük, és ezután az így nyert növényeket az előbbiekben is- 45 meneteit módon szintén nagy relatív légnedvesség és 12-18 °C léghőmérséklet mellett tovább termesztjük és szaporítjuk,

B. az A szerint kapott növényeket elkülönített körülmények között elvirágozni hagyjuk és több hetes 50 időtartamon keresztül vetőmag nyerésére folyamatosan learatjuk azokat a virágfejeket, amelyek olyan vegetációs stádiumban vannak, amikor egy virágfej összes csöves virágjának 30-70%-a nyitva van, a nyert virágfejeket 20 és 30 "C közötti léghőmérsék- 55 létén szárítjuk, az így nyert vetőmagvakból - elszigetelt körülmények között, 18 és 24 °C közötti nappali hőmérsékleten és 12 és 14° közötti éjszakai hőmérsékleten, adott esetben járulékos világítás mellett - utódokat nevelünk és az így kapott növényekből 60 kiszelektáljuk azokat, amelyek egyidőben virágoznak, egyenletes tőlevelű elágazásúak, virágfejeik nagysága 20 és 40 mm között van, valamint hatóanyagként legalább 100 mg % kamazulént, legalább 200 mg % (-)-a-biszabololt és kevesebb mint 50 mg % egyéb 65 biszaboloidot tartalmaznak, az így kiszelektált nővé-15