201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU201954B mért: C: 59,24, H: 7,05, N: 22,95%. 17. példa 2-Amino-6-metoxi-purin-9-béta-D-2’,3’-didezoxi-ribofuranozid 0,5 g (3 mmól) 2-amino-6-metoxi-purint (előállítása: 2-amino-6-klór-purinból (Aldrich Chemical Co., Milwaukee WI és metanolból) és 3’-dezoxi-timidint (1 g, 4,5 mmól) 10 ml 1:1 arányú dimetilszulfoxid:N’,N,-dimetü-formamid keverékben oldunk, hozzáadunk 30 ml 10 mmól kálium-foszfátot (pH- 6,8,0,04% kálium-azid), majd 10.0001.U. tisztított timidin-foszforilázt és 20.0001.U. purin-nukleozid-foszforilázt, amely 10 ml DEAE cellulózhoz van kötve, és a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 8 óra elteltével a keveréket szűrjük, a szűrletet kromatografáljuk (2,5x10 cm, Dowex- 1 -hidroxid), a terméket tartalmazó frakciókat besűrítjük és a mintát AmberliteXAD-2 töltetű oszlopra adagoljuk. Az oszlopot nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd liofilizáljuk, amikoris a cím szerinti vegyületet mérjük. Elemanalízis a C11H15N5O3 összegképletű vegyületre: számított: C: 49,81, H: 5,70, N: 26,40%, mért: C: 49,70, H: 5,72, N: 26,34%. 18. példa 6-(n-Propoxi)-purin-9-béta-D-2’,3’-didezoxi-r ibofuranozid 0,5 g (2,8 mmól) 6-(n-propoxi)-purint (Sigma Chemicals Co., St. Louis MO) és 0,96 g (4,2 mmól) 3’-dezoxi-timidint 5 ml dimetil-szulfoxidban és 5 ml N,N-dimetil-formamidban oldunk, hozzáadunk 30 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffert (pH- 6,8,0,04% kálium-azid), majd 20.0001.U. purin-nukleozid-foszforilázt és 10.000 l.U. timidinfoszforilázt (10 ml DEAE-cellulózhoz kötve) és a kapott reakciókeveréket 35 °C hőmérsékleten 7 órán át keverjük. A gyantát centrifugálással eltávolítjuk, a felülűszót AG1-X2 (OH-forma) töltetű oszlopra adagoljuk, amely oszlophoz XAD-2 töltetű oszlop van kapcsolva (2,5x10 cm, illetve 2,5x20 cm). Az oszlopokat 500 ml vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután flash-kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3x50 cm, kloroform/metanol- 9/1), majd liofilizáljuk, amikoris 0,554 g cím szerinti vegyületet nyerünk. Elemanalízis a C13H18N4O3.0,3 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 55,04, H: 6,61, N: 19,75%, mért: C: 55,05, H: 6,61, N: 19,72%. 19. példa 6-(n-Butoxi)-purin-9-béta-D-2’,3’-didezoxi-ri bofuranozid 0,5 g (2,6 mmól) 6-(n-butoxi)-purint (Sigma Chemicals Co., St. Louis MO) és 0,7 g (3,1 mmól) 3’-dezoxi-timidint 100 ml 10 mmólos kálium-foszfát pufferban szuszpendálunk (pH- 6,8,0,04% káliumazid), hozzáadunk 3500 l.U. tisztított purin-nukleozid-foszforilázt és 800 l.U. timidin-foszforilázt és a kapott oldatot 32 °C hőmérsékleten keverjük. 7 nap elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet 15 kromatografáljuk (AGI-X2 (OH-forma), 2,5x10 cm, 90% víz/metanol), a frakciókból az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a terméket flash-kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 2,5x80 cm, kloroform/metanol- 8/2). A terméket vízben oldjuk és XAD-2 töltetű oszlopon kromatografáljuk (2,5x20 cm). Az oszlopot először 500 ml vízzel átmossuk, majd metanollal eluáljuk. A termék mennyisége liofüizálás után 0,276 g, op.: 55 °C. Elemanalízis a C14H20N4O3 összegképletű vegyületre: számított: C: 57,52, H: 6,90, N: 19,17%, mért: C: 57,86, H: 7,29, N: 18,83%. 20. példa 6-(Ciklopropil-metoxi)-purin-9-béta-D-2’,3’-d idezoxi-ribof uranozid 0,505 g (26,5 mmól) 6-ciklopropü-metoxi-purint (előállítása: 6-klór-purinból a klóratom nukleofil helyettesítésével, amit nátrium-hidridből és ciklopropü-metü-alkoholból nyert alkoxi-anionnal végzünk) és 0,908 g (40,1 mmól) 2,’3’-didezoxi-timidint reagáltatunk, majd a 18. példában leírtak szerint AG1-X2 (OH-forma) és XAD-2 töltetű oszlopokon kromatografálunk. A terméket tartalmazó frakciókat flash-kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3x50 cm, acetonitril/víz- 98/2) és liofilizáljuk. íly módon 0,496 g cím szerinti vegyületet nyerünk. Elemanalízis a C14H18N4O3 összegképletű vegyületre: számított: C: 57,92, H: 6,25, N: 19,30%, mért: C: 57,99, H: 6,28, N: 19,27%. 21. példa 6-(Ciklopentil-oxi)-purin-9-béta-D-2\3’-didez oxi-ribof uranozid 0,506 g (2,48 mól) 6-(ciklopentil-oxi)-purint (előállítása: 6-klór-purinból oly módon, hogy a klóratomot nukleof ü helyettesítéssel nátrium-hidridből és ciklopentanolból nyert alkoxi-anionnal helyettesítjük), és 0,856 g (3,78 mmól) 3’-dezoxi-timidint reagáltatunk, majd a 18. példában leírtak szerint AG1-X2 (OH-forma) és XAD-2 töltetű oszlopokon kromatografáljuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a visszamaradó anyagot flash-kromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3x50 cm, kloroform/metanoí- 95:5), liofüizálás után 0,385 g cím szerinti vegyületet nyerünk 0,15 hidrátja formájában. Elemanalízis a C15H20N4O3.0,15 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 58,68, H: 6,66, N: 18,25%, mért: C: 58,61, H: 6,53, N: 18,25%. 22. példa 6-(Ciklohexil-oxi)-purin-9-béta-D-2’,3’-didezo xi-ribofuranozid 0,5 g (2,29 mmól) 6-(ciklohexil-oxi)-purint (előállítása: 6-klór-purinból oly módon, hogy a klóratomot nukleofil helyettesítéssel nátrium-hidridből és ciklohexanolból nyert alkoxi-anionnal helyettesítjük) és 0,776 g (3,42 mmól) 3'-dezoxi-timidint reagáltatunk, majd a 18. példában leírtak szerint kromatografáljuk, azzal az eltéréssel, hogy az 5 ml dimetil-szulfoxid és 5 ml N,N-dimetil-formamid mel16 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
