201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 201954B hidroxid, 90% metanol/víz), a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot 30% n-propanol/vízben oldjuk, majd kromatografáljuk (50 x 90 cm-es oszlop, BioRap P-2 gyanta). A terméket tartalmazó frakciókat besűrítjük, liofilizáljuk, amikoris 0,225 g cím szerinti vegyületet nyerünk 0,15 hidrátja formájában. Elemanalízis a C13H17N5O2.0,15 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 53,98, H: 6,15, N: 20,98%, mért: C: 54,05, H: 6,15, N: 20,88%. NMR: 8 8,6 (s, 1H, Hs), 8,5 (s, 1H, H2), 6,3 (dd, 1H, Hí), 4,97 (t, 1H, 5’OH), 4,6 (m, 2H, -CH2-), 4,1 (m, 1H, H4), 3,53 (m, 2H, 5’CH2), 2,41 (m, 2H, 2,CH2), 2,03 (m, 2H, 3’CH2), 1,4 (t, 3H, J=0,035Hz, ch3). 13. példa 6-(Dimetil-amino)-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ribofuranozid 1 g (6,13 mmól) 6-dimetil-amino-purint (Sigma Chemicals Co., St. Louis MO) és 3’-dezoxi-timidint (4,44 mmól, 1 g) 50 ml 10 mmólos kálium-foszfát oldatban szuszpendálunk (pH= 7, 0,04% káliumazid), majd hozzáadunk 20001.U. tisztított timidinfoszforilázt és 3000 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt és a kapott keveréket 35 “C hőmérsékleten keverjük. 120 óra elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet kromatografáljuk (Dowex-1 -hidroxid, 2,5 x 8 cm, 90% metanol/víz), a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot 25 ml 30%-os n-propanol/víz elegyben oldjuk és kromatografáljuk (BioRad P-2,5 x 90 cm, 30% n-propanol/víz). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot 30 ml ionmentesített vízben oldjuk, majd kromatografáljuk (Sephadex G-10,5 x 90 cm, víz). A megfelelő frakciókat egyesítjük, liofilizáljuk, amikoris a cím szerinti vegyületet nyerjük 0,3 hidrát ja formájában, op.: 162 °C. Elemanalízis a C12H17N5O2.0,3 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 53,64, H: 6,60, N: 26,06%, mért: C: 53,63, H: 6,63, N: 25,8%. 14. példa 6-(Hidroxi-etil-amino)-purin-9-béta-2’,3’-dide zoxi-ribof uranozid 0,5 g (2,8 mmól) 6-(hidroxi-etil-amino)-purint (Sigma Chemicals Co., St. Louis MO) és 0,76 g (3,3 mmól) 3’-dezoxi-timidint 75 ml 10 mmól kálium-foszfát pufferban szuszpendálunk (pH= 6,8, 0,04% kálium-azid), hozzáadunk 400 I.U. timidinfoszforilázt és 700 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt és a szuszpenziót 35 “C hőmérsékleten keverjük. 8 nap elteltével további 600 I.U. timidin-foszforilázt és 1050 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá, majd még egy napig keverjük, végül a keveréket szűrjük és a szűrletet kromatografáljuk (Dowex-1-hidroxid, 2,5 x 10 cm, metanol). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban betöményítjük. A maradékot ezután szilikagél oszlopra adagoljuk (2,5 x 50 cm, ldoroform/meta13 nol= 8/2, nyomás alatt), a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd liofilizáljuk. íly módon nyerjük a cím szerinti vegyületet 0,65 hidrátja formájában, op.: 153 *C. Elemanalízis a C12H17N5O3.0,65 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 49,53, H: 6,34, N: 24,07%, mért: C: 49,85, H: 6,07, N: 23,70%. 15. példa 6-CiklopropiI-amino-purin-9-béta-D-2’,3’-did ezoxi-ribofuranozid 0,5 g (2,86 mmól) 6-(ciklopropil-amino)-purint (előállítása: 6-klór-purinból /Sigma Chemicals Co., St. Louis MO/ és ciklopropil-aminból) és 3’-dezoxitimidint (4,3 mmól, 1 g) feloldunk 10 ml 1:1 arányú dimetil-szulfoxid:N,,N’-dimetU-formamid keverékkel és hozzáadunk 30 ml 10 mmólos káliumfoszfát puffert (pH- 6,8, 0,04% kálium-azid), továbbá 10.000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 20.0001.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá, amely 10 ml DEAE cellulózzal volt elkeverve, és a kapott szuszpenziót 35 "C hőmérsékleten keverjük. 8 óra elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt következő két oszlopra adagoljuk: Dowex-1-hidroxid töltetű oszlop (2,5x 10 cm), Amberlite XAD-2 gyanta töltetű oszlop (2,5x20 cm). A minta feladása után az oszlopokat nagy mennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd liofilizáljuk, amikoris 0,54 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,55 hidrátja formájában, op.: 63-65 °C. Elemanalízis a C13H17N5O2.0,55 H20 összegképletű vegyületre: számított: C: 54,75, H: 6,40, N: 24,55%, mért: C: 54,67, H: 6,43, N: 24,57%. 16. példa 6-(Cikklopentil-amino)-purin-9-béta-D-2’,3’-d idezoxi-ribofuranozid 0,506 g (2,49 mmól) 6-(ciklopentü-amino)-purint (előállítása: 6-klór-purinból és ciklopentüaminból) 5 ml N,N-dimetü-formamidban és 5 ml dimetil-szulfoxidban oldunk, hozzáadunk 0,894 g (3,94 mmól) 3’-dezoxi-timidint 30 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffernd együtt (pH- 6,8 és 0,04% kálium-azid), a pH értékét ecetsavval 6,8-ra beállítjuk. hozzáadunk 10.000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 20.0001.U. purin-nukleozid-foszforilázt, amely DEAE cellulózhoz van kötve és a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten 8 órán át keverjük, majd szűrjük és a szűrletet 1 éjszakán át -20°C hőmérsékleten tároljuk. Felengedés után a szűrletet kromatografáljuk (2,5x10 cm, Dowex-1-hidroxid, víz), a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, kromatografáljuk (XAD-2 gyanta, 2,5 x 20 cm, 350 ml víz, majd metanol), a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot vízben oldjuk, liofilizáljuk, amikoris 0,459 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,05 hidrátja formájában, op.: 88 °C. Elemanalízis a C15H21N5O2.0,05 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 59,21, H: 6,99, N: 23,02%, 14 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
