201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 201954B tároljuk. 5 nap elteltével a kiváló szilárd anyagot szűrjük, 65%-os metanol/víz elegyben oldjuk és AGI-X2-hidroxid gyantán kromatografáljuk. A terméket 65%-os metanol/víz eleggyel eluáljuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a szilárd anyagot 20 ml kloroform/metanol- 9/1 elegyben oldjuk, szilikagélen kromatografáljuk (3x50 cm), amelyet kloroform/metanol- 9/1 eleggyel hozunk egyensúlyba. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a termékből a szilikagélt eltávolítjuk, oly módon, hogy 95%-os etanol/víz elegyben oldjuk, majd 0,22 p.-os szűrőn átszűrjük. Az etanolt elpárologtatjuk, és a visszamaradó anyaghoz 200 ml vizet adunk. A visszamaradó anyagot liofilizáljuk, amikoris 0,05 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,4 hidrátot és 0,7 ekvivalens metanolt tartalmaz, op.: 130 “C, részlegesen 110 'C hőmérsékleten. Elemanalízis a C14H16SN8O4 . 0,4 H2O . 0,7 CH4O összegképletű vegyületre: számított: C: 41,84, H: 4,68, S: 7,60, N: 26,55%, mért: C: 41,93, H: 4,43, S: 7,48, N: 26,34%. 9. példa 2-Amino-ó-(n-propoxi)-purin-9-béta-2\3’-did ezoxi-ribof uranozid 0,21 g 2-amino-6-(n-propoxi)-purint (előállítása 2-amino-6-klór-purinbói —Aldrich Chemical Co., Milwaukee WI —, amelynek klóratomját a propanolból és nátrium-hidridből nyert alkoxi-anionnal helyettesítettük) és 0,29 g 3’-dezoxi-timidint elkeverünk 100 ml kálium-foszfáttal (pH- 6,8, 0,04% kálium-azid), hozzáadunk 1200I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 84001.U. purin-nukleozid-foszforilázt és a szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 48 óra elteltével a keveréket szűrjük, a szűrletet kromatografáljuk (AGI-X2-hidroxid gyanta, 2x5 cm, 90% metanol/víz), az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a visszamaradó anyagot metanolban oldjuk. Az oldathoz 10 ml vízmentes szilikagélt adunk, a metanolt vákuumban eltávolítjuk és az így nyert szilikagélt olyan szilikagél töltetű oszlopra adagoljuk (2,5x30 cm), amelyet kloroform/metanol- 9/1 eleggyel kiegyensúlyoztunk. Az eluálást ugyanezen oldószerrel végezzük, majd a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A szilikagél eltávolítása után a terméket a 8. példában leírtak szerint kezeljük, amikoris 0,132 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,2 hidrátot tartalmaz, op.: 70 °C. Elemanalízis a C13H19N5O3.0,2 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 52,91, H: 6,56, N: 23,73%, mért: C: 52,52, H: 6,62, N: 23,49%. 10. példa 6-(Etil-tio)-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ribofu ranozid 1 g (5,5 mmól) 6-(etil-tio)-purint (Sigmal Chemical Co„ St. Louis MO) és 4,47 mmól 3’-dezoxi-timidint 50 ml 15 mmólos kálium-foszfátban szuszpcndálunk (pH- 7,2), Hozzáadunk 7890 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 1980 I.U. purin-nukleozidfoszforilázt és a kapott szuszpenziót 35 "C-on keverjük. 144 óra elteltével a keveréket szűrjük, a szűrle11 tét -20 °C hőmérsékleten tároljuk. Felengedés után a szűrlet pH-ját 10,7 értékre beállítjuk ammóniumhidroxiddal és Dowex-l-formiát gyantán kromatografáljuk (2,5x8 cm). Az eluálást 30%-os n-propanol/víz eleggyel végezzük, a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó anyagot 30%-os n-propanol/víz elegyben oldjuk és BioRad P-2 töltetű oszlopon (5x90 cm) kromatografáljuk (30%-os npropanol/víz). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, amikoris 0,427 g cím szerinti vegyületet nyerünk 0,5 hidrát formában. Elemanalízis a C12H16SN4O2.0,5 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 49,81,H: 5,92, N: 19,36, S: 11,44%, mért: C: 49,63, H: 5,95, N: 19,28, S: 11,06%. NMR: 6 8,71 (s, 1H, Hs), 8,67 (s, 1H,H2), 6,33 (t, 1H, Hí’), 4,1 (m, 2H, OH, H4’), 3,4-3,6 (m, 2H, 5’CH2), 1,8-2,4 (m, 4H, 2’ és 3’CH3), 1,5 (t, 3H, ch3). 11. példa 2-Amino-6-(benzü-tio)-purin-9-béta-2\3’-did ezoxi-ribofuranozid 0,5 g (1,9 mmól) 2-amino-6-(benzil-tio)-purint (Sigma Chemical Co., St. Louis MO) és 0,543 g (2 mmól) 3’-dezoxi-timidint 20 ml 10 mmólos káliumfoszfát pufferban (pH- 7, 0,04% kálium-azid) oldunk, hozzáadunk 20001.U. tisztított timidin-foszforilázt és 29001.U. purin-nukleozid-foszforüázt és a szuszpenziót 35 ”C hőmérsékleten keverjük. 3 nap elteltével 80 ml 10 mmólos kálium-foszfát puffert (pH- 7) adagolunk hozzá, majd 1 nap múlva a keveréket szűrjük. A szűrőlepényt 90%-os metanol/víz elegyben oldjuk, szűrjük, a szűrletet Dowex-l-hidroxid töltetű oszlopon (2,5 x 10 cm) kromatografáljuk (90% metanol/víz). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, liofüizáljuk, amikoris 0,086g cím szerinti vegyületet nyerünk. Elemanalízis a C17H19SH5O2 összegképletű vegyületre: számított: C: 57,13, H: 5,36, N: 19,59, S: 8,97%, mért: C: 57,02, H: 5,39, N: 19,51, S: 8,89%. NMR: 88,18 (s, 1H, Hs), 7,3 (m, 5H, 0), 6,6 (s, 2H, NH2), 6,08 (dd, 1, Hí), 4,93 (b, 1H, 5’OH), 4,45 (b, 2H, CH2, 4,08 (m, 1H, H4’), 3,43-3,65 (m, 2H, 5’CH2), 2,35 (m, 2H, 2’CH2), 2,0 (m, 2H, 3’CH2). 12. Példa 6-Etoxi-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ribofuran ozid 0,5 g (3 mmól) 6-etoxi-purint (Sigma Chemicals Co., St. Louis MO) és 3’-dezoxi-timidint (3,3 mmól, 0,75 g) 25 ml 10 mmólos kálium-foszfát pufferban szuszpendálunk (pH- 6,8,0,04% kálium-azid), hozzáadunk 800 I.U. tisztított timidin-foszforüázt és 1200 I.U. purin-nukleozid-foszforilázt, a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük, majd 24 óra elteltével 85 °C hőmérsékleten keverjük, majd 24 óra elteltével 85 ml 10 mmólos káliumfoszfát puffert adagolunk hozzá (pH- 6,8) és a keveréket további 5 napon át a fenti hőmérsékleten keverjük. Ezután a csapadékot szűréssel elválasztjuk, a szűrletet kromatografáljuk (2,5 10 cm, Dowex-1-12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
