201937. lajstromszámú szabadalom • Eljárás indolo-kinoxalin-származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
5 HU 201937 B 6 látható, hogy az indolo-kinoxalin-származékok mind az 1-es, mind a 2-es típusú Herpes simplex virus ellen erós antivirális hatást fejtenek ki. Vírusellenes hatás vizsgálata A vírus-törzseket a stokholmi National Bacteriological Laboratory-tól szereztük be. Az 1-es és 2-es típusú Herpes simplex vírust egérben intracerebrálisan passáltuk. Az egérkisérletekben 2-3 hetes him egereket használtunk. Az intracerebrális fertőzést úgy végeztük, hogy a fecskendőt a szem fölött 3 mm-rel kb. 3 mm mélyen vezettük be, és az egyik szem fölé 0,03 ml virus-szuszpenziót, a másik szem fölé a vizsgált anyagot injektáltuk. A kontroll csoportoknak egyrészt fiziológiás sóoldatot, másrészt virus-szuszpenziót injektáltunk. A szövettenyészet-kisérleteket emberi bárányhártya-AV3-sejtekkel végeztük. A sejteket 12x100 mm-es üvegcsövekben tenyésztettük, Eagles-sót és 10X borjúszérumot tartalmazó Eagles-tápközegben. A teljesen kifejlődött, homogén sejtréteget tartalmazó csöveket 0,15 ml vírussal fertőztük, és a vírust 37 °C-on, 1 órán keresztül hagytuk a sejteken adszorbeálódni. A csövekhez a fertőzés előtti 24. órában és 0. órában adtuk a tápközegben oldott vizsgálandó vegyületet. A vizsgálandó vegyületet tartalmazó tápközeget a kísérlet során minden második nap cseréltük. Az egyes vizsgálat-sorozatokban a vizsgálandó anyagokat különböző koncentrációkban alkalmaztuk párhuzamosan, az 50%-os sejtpusztító hatás (EDso) meghatározása céljából. A vizsgálati eredmények szerint a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek EDso-értéke minden esetben 0,5 és 2 mg/1 között volt. A vírusokkal végzett kísérletek eredményeit a 4. és 5. ábrákon grafikusan is bemutatjuk. ’ A 4. ábrán látható a dialízis hatása a 5 B196 antivirális tulajdonságaira. Az 5. ábra mutatja a HSV-l-virus inaktiválódását, az idő függvényében, a B196 különböző koncentrációszintjén végzett inkubálás után. 10 A 4. ábrán bemutatott kísérletekben a B196-ot különböző koncentrációkban elegyítettük az 1-es típusú Herpes simplex vírussal, és az elegyet 4 °C-on egy éjszakán keresztül dializáltuk, majd közvetlenül ezután 15 intracerebrálisan injektáltuk az egerekbe. A kontroll csoportban nem volt túlélő állat. A 4. ábrán látható, hogy a túlélési arány nagymértékben megnövekszik, ha a vírust az injektálás előtt B196-tal elegyítjük. A 20 túlélési arány 0-ról 100X-ra növekedett. A hatás még akkor is majdnem ilyen nagymértékű, ha a virus és a vizsgált anyag elegyét az injektálás előtt dializáljuk. Ez valószínűleg közvetlen kölcsönhatásra utal a vizsgált 25 vegyület és a vírus-részecskék között. A fenti feltételezést alátámasztják azok a kísérletek is, amelyek során a vírust és a vizsgálandó vegyületet együtt inkubáltuk, és különböző idők elteltével egerekbe injektál- 30 tűk. Az 5. ábrán látható kísérletben a B196- -ot két koncentrációszinten (75 és 150 jug/ml) . különböző időn keresztül 4 °C-on együtt inkubáltuk 1-es típusú Herpes simplex virus- ; 35 sal, majd az elegyek fertőzöképességét egerekbe intracerebrálisan injektálva meghatároztuk. A kontroll vírust ugyanannyi időn keresztül inkubáltuk 4 °C-on. Ezekben a csoportokban nem volt túlélő állat. 40 Az 5. ábrán látható, hogy a vírus a vizsgált anyag jelenlétében lassan inaktiválódik. Az 1. táblázatban ismertetjük néhány további, találmány szerinti eljárással elöálli- 45 tott vegyület vizsgálati eredményét is. 1. táblázat Példa száma LDso egéren (mg/kg) Herpes simplex egérben szövet- ÖLso* tenyészet (ng/ml) ÖLso (ug/ml) Raji LDso (ug/ml) HeHr-1 LDso (pg/ml) 4. 200 350 1 0.9 0.7 5. 180 170 1 1 0.5 6. 250 3 0.5 0.9 0.7 8. 200 350 1 0.9 0.7 9. 250 20 1 0.8 0.7 10. 220 7 0.5 1 1 *: ÖLso = 50X-OS túléléshez szükséges koncentráció 5
