201922. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,5-benzoxatiepin-származékok és ilyeneket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
33 HU 201 922 B 34 majd 3 órán belül a bal oldali ív alakú koronáriás eret kipreparáljuk. Ezután ezt az eret kb. 3 mm széles gyűrűkre vágjuk, majd kettős falú edényben lévő szervfürdőbe merítjük egy horogpár segítségével. A fürdő 20 ml Krebs-Henseleit-féle oldatot tartalmaz. Az egyik horgot a szervfürdő aljához erősítjük, a másikat pedig egy feszültségnyomás átalakítóhoz erősítjük és izometrikusan mérjük és kirajzoljuk a sertés koronáriás-erek öszszehúzódását. A szervfürdő hőmérsékletét 37 *C-on tartjuk és a Krebs-Henscleit oldatot, amely 118,3 mmól NaCl-ot, 4,7 mmól KCl-ot, 1,2 mmól KH2P04-ot, 2,58 mmól CaC1.7H20-ot, 1,15 mmól MgS04.7H20-ot, 25 mmól NaHC03-ot és 11,1 mmól klükózt tartalmaz, 97% 02 + 3% C02 tartalmú gázzal telítjük. 1-2 óra elteltével, amikor a véredények stabil tenziót mutatnak, a nyomás értékét 2 g-ra állítjuk be és 1 O'* mól serotonint adagolunk a szervfürdőbe és kb. 1 óra elteltével ellenőrizzük a készítmény reagálását. Amikor a véredények reakciója 2-3 serotonin-adag beadagolása után stabilizálódik, a kívánt mennyiségű vizsgálandó vegyületeket adagoljuk a szervfürdőbe mindig 10 perccel a következő serotonin adag hozzáadása előtt. A serotogén blokkoló hatást a vizsgálandó vegyülct adagolása előtt és után adagolt sterotonin által okozott összehúzódás mértékéből állapítjuk meg. Vizsgálati eredmények A találmány szerinti vegy ületekkel kapcsolatos kísérleti eredményeket a 8. táblázatban foglaltuk össze. 8. táblázat Suerptpmom S2-receptort blokkoló hatás sertés-koronáriás érpreparátumokon meghatározva Példa Konc. Mérések Szerotonin által okozott száma (mól/1) száma összehúzódás gáüása % 1. 10‘5 3 85,7 ± 9,7 io-* 3 67,2 ± 8,0 12-(cisz-izo-10^ 3 100 mcr)-hidroklorid 10‘7 4 76,0 ± 5,3 28. 103 3 93,3 ± 6,9 10^ 3 73,5+ 10,2 34. 103 2 100 lO-4 3 83,3 ± 1,0 2. példa Az előző 1. példában leírt eljárást követve mértük a következő 9. táblázatban felsorolt vcgyülctck szerotogén blokkoló hatását 9. táblázat Pclda száma Konc. (mól/1) Mérése: száma Szerotonin által okozott összehúzódás gáüása % 39. 10'7 (monohidroklorid) 3 57 ± 7,1 59. 10"7 3 70,7 ±2,0 3. példa A találmány szerinti vegyületek orális szerotogén blokkoló hatása Vizsgálati eljárás A vizsgálatokat 10-14 kg súlyú, hím tacskó kutyákon végeztük. A kísérleti állatok comb artériájába és vénájába polietilén csöveket építettünk be egyrészt a szisztémás vérnyomás mérésére, másrészt a vizsgálandó vegyület adagolására. A csövek műtéti úton való behelyezését steril körülmények között, 20 mg/kg mennyiségben adagolt pcnlobarbitállal végzett altatás közben végeztük. A polietilén cső másik végét a dorzális oldalon vezettük ki. 2-3 nappal a műtét után az artériába vezetett műanyag csövet nyomásmérőhöz csatlakoztattuk és mértük és folyamatosan rögzítettük a szisztémás vérnyomást. 3-30 pg/kg szerolonin intravénás, a műanyag csövön keresztül történt beadagolása után dózistól függő tranziens magas vérnyomásos reakciót figyelhettünk meg. 30 p/kg mennyiségű szerotonin 30 percen belüli ismételt adagolása esetén ismétlődő magas vérnyomásos reakciót állapítottunk meg. Ennek alapján 30 pg/kg dózist alkalmaztunk a találmány szerinti vegyületek orális adagolás esetén mutatott hatásának vizsgálatára. így kétszer 30 pg/kg szerotonint adagolunk 30 perces intervallumon belül, majd a 12. példa szerinti vegyületct adagoltuk orálisan 0,1,0,3 és 1,0 mg/kg mennyiségben és vizsgáltuk a 30 pg/kg szerotoninra kiváltott magas vérnyomásos reakciót addig, amíg elértük a magas vérnyomásos reakció gyógyszeradagolás előtti szintjét. Vizsgálati eredmények A fenti vizsgálatokkal kapcsolatos eredményeket a következő 10. táblázatban foglaltuk össze. A kapott eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti eljárással előállított 12. számú vegyület 0,1 mg/kg mennyiségtől felfelé a dózis függvényében gátló hatást fejt ki a szerotonin magas vérnyomást kiváltó hatására. 10. táblázat A találmány szerinti vegyülct gátló hatása 30 pg/kg mennyiségben i.v-an adagolt szerotonin által kiváltott magas vérnyomásra, elaltatott tacskó kutyák esetében. Adag Vizsgá- Max. A max. gátlás kifejlődésének latok gátlás ideje tartama mg/kg száma (%) óra/adagolás után óra 0,1 4 27,8 2 4 0,3 4 30,9 3 6 1,0 3 72,0 3 8 4. példa Kalcium-antagonista hatás Vizsgálati eljárás 14 hetes hím, spontán magas vémyomású patkányoknál kimetszettük a mesentériumot, majd átáramollattuk 37 *C hőmérsékleten Krebs-Hcnseleit oldattal a mesentériás artérián keresztül. Az áramoltatási sebességet 4 ml/pcrc értéken tartottuk a kb. 40 Hgmm-es perfúziós nyomás eléréséig. A kalcium antagonizmus hatás kimutatására a mesentériás artériába injekciózott 10 mg KC1 által kiváltott perfúziós nyomás növekcdésgátlást alkalmaztuk. A vizsgálandó vegyületct 30 perccel a KC1 adagolása előtt injekcióztuk az artériába. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 18
