201914. lajstromszámú szabadalom • Eljárás helyettesített imidazolinon- és imidazolintion- származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 HU 201 914 B 10 Kitermelés: 75% 'H-NMR (CDC13): 8 = 1,6 (d, 6H, CH3); 2,7; 3,0 (2d, 2H, CHj); 3,4 (s, 2H, CHa); 3,75 (s, 3H, CH3); 4,4 (m, 1H, CH); 4,6 (m, 1H, CH-OH); 5,6 (dd, 1H, CH); 6,4 (d, 1H, CH); 6,8-7,4 (m, 9H, aromás-H) ppm. 14. példa Metil-eritro-(E)-3,5-dihidroxi-7-[4-(4-fluor-fcnil)-l-izopropil-3-fenil-4-imidazolin-2-on-5-iI]-hcpt-6-enoát (14) képlett! vegyidet A 7. példa szerinti módon 0,8 g (1,7 mól) 13. példa szerint előállított vegyületből 320 mg mctil-critro-(E)-3,5-dihidroxi-7-[4-(4-fluor-fcnil)-l-izopropil-3-fcnil-4-imidazolin-2-on-5-il]-hept-6-enoátot kapunk. Kitermelés: 40% 'H-NMR (CDC13): 8 = 1,5 (m, 8H, CH3, CH2); 2,5 (m, 2H, CH2); 3,7 (s, 3H, CH3); 4,2; 4,4 (2m, 2H, CH); 4,5 (m, 1H, ch9; 5,6 (dd, 1H, CH); 6,4 (d, 1H, CH); 6,8-7,3 (m, 9H, aromás-H) ppm. 15. példa N-[2-(4-FIuor-fenil)-2-oxo-etil]-N-metil-N’-fenil-tiokarbamid (15) képlett! vegyidet A 3. példa szerinti módon 3 g (12,5 mmól) 2. példa szerint előállított vegyületből és 1,6 g (12,5) mmól) fenil-izotiocianátból 3,67 g cím szerinti vegyületet kapunk. Kitermelés: 97,2%. 'H-NMR (DMSO): 5 = 2,3 (s, 1H); 3,35 (s, 3H); 4,0 (q, 1H); 7,0-7,6 (m, 5H) ppm. 16. példa 4-(4-Fluor-fenil)-l-metil-3-fenil-4-imidazolin-2-tion (16) képlett! vegyület A4, példa szerinti módon 3,5 g (11,6 mmól) 15. példa szerint kapott vegyületből 2,99 g cím szerinti vegyületet állítunk elő. Kitermelés: 91%. 'H-NMR (CDC13): 8 - 3,7 (s, 3H); 6,8-7,5 (m, 10H) ppm. 17. példa (E)-3-[4-(4-Fluor-fenil)-l -metil-3-fenil-4-imidazolin-2-tion-5-il] -prop-2-enal (17) képlett! vegyület Az 5. példa szerinti módon 2,4 g (8,45 mmól) 16. példa szerint kapott vegyületből 1,8 g terméket állítunk elő. Kitermelés: 61,1%. 'H-NMR (CDC13): 8 = 4,0 (s, 3H); 6,5 (dd, 1H); 6,9 (d, 1H); 6,95-7,5 (m, 9H); 9,5 (d, 1H) ppm. 18. példa Metil-(E)-7-[4-(4-fluor-fenil)-l-mctil-3-fenil-4-imidazolin-2-tion-5-il]-5-hidroxi-3-oxo-hept-6-enoát (18) képlctű vegyület A 6. példa szerinti módon 1,8 g (5,3 mmól) 17. példa szerint előállított vegyületből 3,0 g nyersterméket kapunk. Kitermelés: 100% 'H-NMR (CDC13): 8 = 2,3 (s, 2H); 3,5 (s, 3H); 3,7 (s, 3H); 3,75 (s, 2H); 4,65 (m, 1H); 5,85 (dd, 1H); 5,9 (d, 1H); 6,8-7,5 (m, 9H). 19. példa Metil-eritro-(E)-3,5-dihidroxi-7-[4-(4-fluor-fcnil)-l-metil-3-fenil-4-imidazolin-2-tion-5-il]-hept-6-enoát (19) képletű vegyület ki. példa szerinti módon 2,11 g (4,6 mmól) 18. példa szerint előállított vegyületből 0,3 g terméket állítunk elő. Kitermelés: 14,2% 'H-NMR (CDC13): 8 = 1,6 (m, 2H); 2,6 (d, 2H); 3,7 (s, 3H); 3,8 (s, 3H); 4,2 (m, 1H); 4,5 (m, 1H); 5,85 (dd, 1H); 5,9 (d, 1H); 6,9-7,4 (m, 9H) ppm. 20. példa Metil-eritro-(E)-3,5-dihidroxi-7 - [4-(4-fluor-fenil)-1 --izopropil-3-feniI-4-imidazolin-2-tion-5-il]-hept-6--enoát (20) képletű vegyület A 20. példa szerinti vegyületet a 19. példa analógiájára állítjuk elő. Alkalmazási példák 1. példa A G. C. Ness és munkatársai szerinti Archives of Biocemistry and Biophysics 197, 493-499 (1979) enzimaktivitás meghatározást módosítva végeztük. Hím patkányokat (300-400 g testtömeg) 11 napig kezeltünk altromin por takarmánnyal, amelyhez kilogrammonként 40 g kolesztir-amint adagoltunk. Az állatokat lefejeztük, és kivettük az állatok máját, amelyet jégre tettünk. A májat felaprítottuk, és Potter-Elvejem-homogenizátorban háromszor 3 térfogatnyi következő összetételű eleggyel homogenizáltuk: 0,1 mól szacharóz, 0,05 mól kálium-klorid, 0,04 mól KxHy-foszfát, 0,03 mól etilén-diamin-tetraecetsav, 0,002 mólditiotreit (SPE)-puffer, pH = 7,2. Ezután az így kapott szuszpenziót 15 000 g-n 15 percig centrifugáljuk és az üledéket eldobjuk. A felülúszót 75 percig 100 000 g-n ülepítjük. A pelletet 1/4 térfogatnyi SPE-pufferban szuszpendáljuk, még egyszer homogenizáljuk, és ismét 60 percig 100 000 g-n centrifugáljuk. A pelletet ötszörös térfogatnyi mennyiségű SPE-pufferban szuszpendáljuk, homogenizáljuk és -78 ”C hőmérsékletre fagyasztjuk, és tároljuk (= cnzimoldat). A tesztvizsgálatban a tesztvegyületeket (vagy referenciaanyagként mcvinolint) feloldunk dimetil-formamidban, amihez 5 térfogal% 1 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk, és 10 pl-nyit különböző koncentrációban az enzimtesztben alkalmazzuk. A tesztet a vegyületek 20 perces 37 °C hőmérsékleten enzimmel végzett előinkubálása után indítjuk. A teszt elegy 0,380 ml és 4 pl glükóz-6-foszfátot, 1,1 mg szarvasmarha-szérum albumint, 2,1 pl ditiotreitet, 0,35 pl NADP-t, 1 egység glükóz-6-foszfát-dchidrogenázt, 35 pmól K„Hy-foszfátot (pH = 7,2), 20 pl enzimpreparátumot és 56 nmól 3-hidroxi-3-metil-glutaril koenzim At (glutaril-3-'4C) 100 000 dpm-t tartalmaz. 60 perces 37 *C-on végzett inkubálás után az elegyet centrifugáljuk, és a felülúszóból 600 pl-t egy 0,7 x 4 cm-cs, k lórid formában levő (0,149-0,074 mm) anioncseré lő vei töltött kolonnára visszük. 2 ml deszt. vízzel mossuk, és 3 ml szcintillációs 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
