201906. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy fenil-karbamát-származék és savaddíciós sói és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
7 HU 201 906 B 8 patkánybőr körülbelül 2 cm2 felületének egyik oldalára adagoltuk. A bőrfelület másik oldalát fiziológiás konyhasóoldattal érintkcztcttük. A hatóanyagnak a konyhasóoldatban kialakuló koncentrációját a szokásos módon - például túlnyomásos folyadékkromatográfiával vagy 5 spektrofotometriás úton - vagy a radioaktivitás meghatározásával mértük. E vizsgálat során patkánybőrt alkalmazva például a következő áthatolási sebességeket figyeltük meg: A fentiekben definiált „A” vegyület: 23,6 ± 14,9% Az (I) képletű vegyület szabad bázis formájában: 28,0 ± 8,2% Továbbá azt találtuk, hogy az (I) képletű vegyülctck, amelyek a fentiek értelmében transzdermálisan adagolhatók, az acetilkolinészterázt tartósan és állandó mértékben gátolják. Standard vizsgálati módszerekkel igazolható, hogy a hatás lassan következik be, és ez különösen előnyös e vegyületek elviselhctősége szempontjából. így például megmértük a találmány szerinti adagolásra alkalmas (I) képletű vegyületeknek a patkányagy különböző területeiről származó acetilkolinésztcrázokra kifejtett gátló hatását ex vivo vizsgálatban a vegyületek transzdermális adagolása után, és összehasonlítottuk 25 az egyéb utakon végzett adagolás után kapott gátlások értékeivel. A vegyületeket n-heptánnal 1 vagy 3 mg/20 fii koncentrációra oldottuk vagy hígítottuk. OFA-törzsű, mintegy 250 g testtömegű hím patkányok nyaki területét leborotváltuk, és az oldatot mikropipettával juttattuk a bőrre. Az alkalmazás helyét azonnal befedtük vékony műanyagfilmmel vagy tapasszal. Az állat a tapaszhoz nem férhetett hozzá. Az adagolás után különböző időpontokban lefejezéssel megöltük az állatokat, és a megmaradó AChE aktivitást mértük. 10 A fentiekben definiált „A” vegyület transzdermális adagolása például tartósan és dózistól függő módon gátolta az acetilkolinészterázt. Szemben a hatásnak azzal a gyors fellépésével, amelyet orális vagy szubkután adagolás után figyeltünk meg (a hatás maximuma 15, 15 illetve 30 perc múlva), transzdermális adagolás után az AChE gátlása lassan lépett fel (a hatás maximuma több mint 2 óra múlva jelentkezett), és ez nem érintette az AChE-gátlás agy területek szerinti szelektivitását. Eredményeinket az alábbi 2. táblázatban összegez- 20 tűk. A transzdermális alkalmazás után 24 órával még megfigyelhettük az AChE-aktivitás gátlását a centrális és perifériás területeken; ezzel szemben az ,A” vegyület orális alkalmazása után 24 órával az enzimgátlás már nem volt megfigyelhető, és szubkután adagolás után 24 órával csak a szívben jelenlevő acetilkolinészteráz gátlása volt jelentős. 2. táblázat AChE-aktivitás a kontrollértékek százalékában ± SD A kezelés után eltelt idő Állatszám n Agykéreg Hippocampus Striatum Agyhíd/velő Szív Vér 30 (imólAg transzdermálisan 0.5 óra 6 86.1 ± 5.6 86.7 ± 5.9 89.7 ± 8.4 91.5 ±3.8 109.0 ±9.3 71.3 ± 12.3 6 óra 6 42.4 ± 11.7 45.7 ±15.0 65.9 ± 15.5 53.6 ± 13.3 52.0 ± 13.1 41.9 ±13.1 24 óra 6 73.8 ± 5.7 80.4 ± 8.8 81.0 ±8.2 85.3 ±4.2 63.9 ±12.5 78.1 ±17.8 10 pmól/kg orálisan 0.5 óra 6 21.0 ±3.5 19.7 ±3.8 32.9 ±10.7 26.6 ±4.0 71.2 ± 11.2 34.0 ±2.0 6 óra 6 65.3 ±21.3 62.0 ± 15.4 87.5 ± 8.8 80.3 ± 9.2 101.0 ±7.0 77.2 ± 14.7 24 óra 6 99.2 ±8.9 97.2 ±7.1 96.7 ± 3.3 104.1 ±6.8 94.2 ±9.2 97.2 ± 13.8 8 (imól/kg szubkután úton 0.5 óra 6 16.8 ± 2.0 18.3 ±3.1 28.2 ± 12.2 20.9 ± 2.9 33.3 ± 5.6 17.4 ±4.1 6 óra 6 85.1 ± 1.6 81.4 ±7.6 82.9 ± 2.8 87.1 ±4.1 51.0 ± 17.9 79.5 ± 8.2 24 óra 6 93.8 ± 5.9 99.9 ±9.9 91.0 ±2.3 98.7 ±6.0 65.7 ±21.2 105.7 ± 16.8 Kontrollértékek (pikomól/mg x perc ± SD, n = 15): Agykéreg: Agyhíd/velő: 3,67 ± 0,30 7,98 ± 0,36 Hippocampus: Szív: 4,42 ± 0,30 2,27 ± 0,39 Striatum: 33,8 ± 3,08 Vér: 331,4 ±44,2 5
