201870. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként izotretinoint tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

1

HU 201870 B

2

2. ** táblázat IZOTRETINOIN (mg/kg)

0

1

5

10

Szérum

HAL

szérum

44,8±7,1

67,5+8,0

73,3±17,1

97,5±19,0*

OH-HAL

Szérumban

1,8±.2

4,2±.5*

3,3±,2*

3,0±.4

OH-HAL/HAL

arány

Vörösvérsejtek

0,038

0,060

0,044

0,029

HAL

Vörösvérsejtek

OH/HAL

Vörösvérsejtekben

13,4±2,4 <2 <2

18,1+4,8 < 2

33,8±16,8

3,2±.8*

37,2±8,8

0H-HAI7HAL

<.15

<.11

<.06*

0,09*

Agy

HAL

Agy

465±44

413±31

344±26

739±90*

OH-HAL

Agyban

96±13

64±8

45±4

152±28

OH-HAL/HAL

arány

0,216

0,15

0,13*

0,19

2. ** táblázat. Minden szövetfajtára az összegezett adatokat (átlag±standard hiba) nanogramm/milliliterben (ng/ml) adjuk meg.

*- a kontrolitól való szignifikáns eltérés, p<0,05 szinten, Tukey-módszerével, az átlagok többszörös összehasonlításával.

A vörösvérsejtek ossz HAL koncentrációját szignifikánsan nem befolyásolja, F(3,31)-l,71, p-1,71, p-0,186. Az agy ossz HAL koncentrációját szignifikánsan megváltoztatja, F(3,31)-9,75, p-0,0001. Az 35 agy átlagos HAL koncentrációja a közbülső dózisokban csökkenő tendenciát mutat, ugyanakkor azonban 10 mg/kg dózisban szignifikánsan emelkedik (p<0,05).

A szérum OH-HAL koncentrációját szignifikánsan megváltoztatja, F(3,31)=9,56, p-0,0001. Aszérun OH- 40 HAL koncentrációjának átlagértékei a kontrolihoz viszonyítva szignifikánsan emelkednek (p<0,05) 1 és 5 mg/kg ISOT-dózisban. A vörösvérsejtekben mért OH- HAL koncentrációk közül sok érték - különösen 1 és 5 mg/kg ISOT- dózisban - a meghatározás 45 minimális érzékenységénél vagy az alatt van (ez az érték Korpi és tsai (13) szerint <2 ng/ml). Statisztikai célokból ezeket az értékeket elsősorban a meghatározás alapvonal varianciájának (szórásának) tekintjük.

Az értékeket azonban itt csupán a felső határként 50 (<2 ng/kg) adjuk meg. Az eljárás során a vörösvérsejtek OH-HAL össz-koncentrációja a megismételt MANOVA mérés szerint szignifikánsan változik, F(3,31)-11,L p-0,0001. A vörösvérsejtek átlagos OHHAL koncentrációi 10 mg/kg ISOT-dózisnál díszig- 55 nifikánsan (p<0,05) emelkednek az alapvonal felett.

Az agyi OH-HAL össz-értékek ugyancsak szignifikáns mértékben változnak (F(3,31)-8,27, p-0,0003 és az egyedi értékek a vörösvérsejtek mintájára alakulnak, éspedig kisebb dózisokban csökkennek, míg magasabb 60 dózisokban növekednek. Az agyi OH-HAL egyedi átlagértékek egyike sem éri azonban el a szignifikancia határát.

A szérum OH-HAIVHAL arányát az izotretinoin szignifikánsan megváltoztatja, F(3,31)—3,38, 65

p-0,0306. Azonban az adott dózisoknál egyetlen átlagérték sem kükönbözik szignifikánsan a kontrolitól. A vörösvérsejt értékek tekintetében a nagyon alacsony értékeket tekintjük a mérések alapvonal varianciájának, míg a közölt értékek számított felső határoknak felelnek meg. Ezt az eljárást követve a vörösvérsejtekben az arány átfogóan szignifikáns mértékben változik F(3,31)=12,66, p-0,0001; a különálló átlagok a közbülső dózisoknál szignifikáns mértékben csökkennek (p<0,05). Az ISOT az agyban a OH-HAL/HAL arányt ugyancsak szignifikánsan megváltoztatja, F(3,31)=4,86, prob>F=0,0069 mellett, ugyanakkor csak az 5 mg/kg dózisnál kapott átlag csökkenése éri el a szignifikanciát (p<0,05).

A fenti adatok alapján megállapítható, hogy az ISOT patkányoknak dimetil-szulfoxidban beadva növeli a HAL és OH-HAL koncentrációját a szérumban, az agyban és a vörösvérsejtekben. Ezenkívül közbenső ISOT mellett mind a HAL mind a OH-HAL koncentrációja csökken az agyban. Az ISOT agyban és vörösvérsejtekben mutatott fenti, kétfázisú dózisfüggő határásra irányúló tendenciáját alátámasztja az a kísérleti tény, hogy az arányok ebben a két szövetféleségben hasonlóképpen kétfázisúak és szignifikánsan (p<0,05) dózisfüggők. Ezenkívül megismételt MANOVA mérések szerint a fordított kétfázisú trend a szérum arányok átlagában szignifikáns, F(3,31)—3,38 (p-0,0306).

Az ISOT látszólagos aktivitása szignifikáns szövetféleség- specifikus változásokat mutat. Ismételt MANOVA mérések eredményei azt mutatják, hogy mindhárom függő mérés (HAL, OH- HAL és a OH-HAL/HAL arány) a három különböző szövetféleségben eltérően változik. A kapott eredmények a

6