201777. lajstromszámú szabadalom • Eljárás folinsav izomerjeinek szétválasztására frakcionált kristályositás útján
HU 201777 B 1. Példa Kaldum-(6RS)-folinát szétválasztása és a kalcium-(6S)-foIinát elkülönítése 50 g tiszta kalcium-(6RS)-folinát 500 ml vízzel készített oldatához 100 g nátrium-jodidot adunk, és az oldat pH értékét 7,0-ra állítjuk. Az oldatot keverés közben 0 °C-ra hűtjük. Az oldat pH értéke mintegy 7,7-re emelkedik. 15-20 óra elteltével a kivált terméket szűrjük, tömény vizes nátrium-jodid-oldattal, majd etanollal mossuk. A kapott kalcium-folinát (6R)-tartalma 98,1%, ahogy nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatok (Resolvosil-BSA-7 oszlop) mutattak. Kalciumkloridos vízből történő átkristályosítás után a termék tiszta, 100,0%-os kalcium-(6R)-folinát. Fajlagos forgatás: [ct]20D = +43,7° (c=l; víz) (vízmentes kalciumsóra vonatkoztatva). Vfeoldékonyság 20 °C-on 2,0 g/100 ml. A szűrlethez 1 liter etanolt adunk, keverés közben 3 °C-ra lehűtjük. 15-20 óra elteltével a terméket szűrjük és etanollal mossuk. A kapott kalciumfolinát 84%-a kalcium-(S)-folinát és 16%-a kalcium-(6S)-folinát. Hozam: 27 g kalcium-klorid jelenlétében vízből átkristályosítva a termék 97,6% kalcium-(6S)-folinátot tartalmaz. További átkristályosítással a céltermék koncentrációja 99,5% felé emelhető. Fajlagos forgatás: [ocj D = -15° (c=1, víz) (vízmentes Ca-sóra vonatkoztatva). A 6R- és 6S-izomertartalmat nagnyomású folyadékkromatográfiás módszerrel határoztuk meg, Resolvosil BSA-7 típusú oszlopon, oldószerként nátrium-dihidrogén-foszfát 0,15 mólos vizes, 4,5 pH-jú oldatát alkalmazva 2 ml/perc áramlási sebesség és 286 nm hullámhosszon történő detektálás mellett. 2. példa (6RS)-Folinsav szétválasztása és a nátrium-(6R- folinát és kalcium-(6S)-folinát elkülönítése 25 g (6RS)-folinsavat 70 ml vízben szuszpendálunk és 49 ml 2n nátrium-hidroxid-oldat adagolásával oldatba visszük. Az oldathoz 40 g nátrium-kloridot és 140 g nátrium-jodidot adunk. Nyálkás anyag válik ki, amelyet néhány óra elteltével leszűrünk. Az anyagot metanollal mossuk. A kapott nátrium-(6R)-folinát optikailag tiszta, (6R)-tartalma 99%. Az anyalúghoz 25 g kalcium-kloridot adunk, és az oldat pH-értékét 8,5-re állítjuk. Lassan kalcium(6S)-folinát válik ki, a (6S)-tartalom 78%, 22% (6R)-folinát mellett. Ezt a nyers kalcium-(6S)-folinátot 30-35 °C-os vízben oldjuk. Az oldathoz aktívszenet, valamint a szűrhetőséget javító anyagot (Solka floc®), szűrjük, a szűrletet 10%-os koncentrációra bepároljuk, majd 1-5 °C-on kristályosítjuk. A kapott kalcium-(6S)-folinát (6S)-tartalma közel 98%. 3. példa (6RS)-folinát szétválasztása és a nátrium-(6R)folinát és magnézium-(6S)-folinát elkülönítése 25 g (6RS)-folinsavat 75 ml vízben szuszpendálunk, majd 5 n vizes nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával feloldjuk. Az enyhén lúgos oldathoz keve5 rés közben 75 g nátrium-bromidot, majd 200 ml metanolt adunk. Két hét alatt a nátrium-(6R)-folinát lassan kikristályosodik. A terméket szűrjük és metanollal mossuk, majd szárítjuk. A kapott nátrium-(6R)-folinát optikailag tiszta, (6R)-tartalma 98%. Hozam: 9 g. Fajlagos forgatás: [a] D = + 39,5° (vízmentes Na-sóra vonatkoztatva, c— 1, víz). Az anyalúgból a metanolt eltávolítjuk, a pH-értéket 9,8-ra állítjuk, az elegyhez 25 g magnéziumkloridot adunk. Lassú keverés közben a magnézium-(6S)-folinát lassan kristályosodik. Mintegy 100 óra elteltével a csapadékot leszívatjuk, etanollal mossuk, majd szárítjuk. (6S)-tartalom 85%. Magnézium-klorid jelenlétében végzett átkristályosítás után a magnézium-(6S)-folinát optikailag tiszta. Tömeg: 12 g, [a]20D = -18,8° (c = 1, víz). 4. példa Nátrium-(6RS)-folinát szétválasztása és a két diasztereomer elkülönítése 25 g (6RS)-folinsav 75 ml vízzel és 5 n vizes nátrium-hidroxid-oldat elegyével készített oldatához 20 °C-on 140 g nátrium-jodidot adunk és az oldatot 5 °C-ra hűtjük. A kristályos elegyet egy éjszakán át állni hagyjuk, majd a kivált nátrium(6R)-folinátot szűrjük és acetonnal mossuk. A termék (6R)-része 82,9%. Hozam: 7 g. Az egyesített anyalúgokhoz 600 ml acetont adunk, és az elegyet 0 °C-on keverjük. A kivált csapadékot kiszűrjük. 71% nátrium-(6S)-folinátot tartalmaz. Hozam: 11 g. 5. példa Kalcium-(6RS)-folinát ammónium-jodid közel semleges közegben végzett adagolásával 50 g kalcium-(6RS)-folinátot és 100 g ammónium-jodidot 36 °C-on 500 ml vízben oldunk. Az oldat pH-értéke 7,7. Az oldatot lassú keverés közben szobahőmérsékletre hagyjuk lehűlni, majd tovább hűtjük először 5 °C-ra, majd 0-2 °C-ra, az oldathoz oltókristályként néhány milligramm tiszta kalcium(6R)-folinátot adunk, amire a kristályosodás megindul. A főleg kalcium-(6R)-folinátból álló terméket leszűrjük, etanollal mossuk, majd szárítjuk. (6R)-folináttartalma: 98%. A mosóoldattal egyesített szűrlethez keverés közben 1 liter etanolt adunk. A lassan kiváló, főleg kalcium-(6S)-folinátból álló frakciót kiszűrjük, etanollal mossuk és szárítjuk. A (6S)-folinát-tartalom 96%. A kapott kalcium-(6R)folinát, illetve (6S)-folinát aktív szenet és szűrési segédanyagot tartalmazó keverés vízből átkristályosítható, így a (6R)-, illetve (6S)-tartalom 99,5-99,7%-ra növekszik. 6. példa Kalcium-(6RS)-folinát nátrium-bromid közel semleges közegben végzett adagolásával végzett szétválasztása, majd a kalcium-(6S)-folinát CaCb hozzáadásával végzett elkülönítése 50 g kalcium-(6RS)-folinát 500 ml vízzel készített oldatához 75 g nátrium-bromidot adunk. A 7,4 pH-jú oldatot keverés közben 35 ®C-ról 1-3 °C-ra hűtjük, így a kristályosodás lassan indul. A kristályokat leszűrjük és metanollal mossuk. A termék 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
