201680. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tumorgátló hatású szinergetikus gyógyszerkészítmény előállítására
7 HU 201 680 A 8 melyeket 106 sejtre számolva 2-3 pg hTNF-et tartalmazó talajban hetenként megismételt átoltással tenyésztettünk ki - teljes kereszt-rezisztenciát mutatnak az egér TNF-re. Ez a kereszt-rezisztencia nagyon figyelemre méltó. A hTNF in vivo vizsgálatát [BALB/c x C57BL/6]F! nőstény egéren végeztük. Az állatoknak intradermálisan 5 x 105 Meth A szarkóma sejtet injektáltunk, majd 7 nappal később az állatok egyetlen intravénás adagban hTNF-et kaptak. 24 óra elteltével a tumor vérzéses elhalását az alábbi értékelési rendszer segítségével értékeltük ki: (-) nincs hatás (+) enyhe hatás (++) közepes hatás (+++) erős hatás, a tumoros felület 90%-ára kiterjedő hatás (Carswell és munkatársai fentebb idézett cikke). Az eredmények szerint a hTNF a standard TNF vizsgálatban in vitro és in vivo hasonló hatást mutat, noha 5 általában a hTNF humán célsejtekkel szembeni specifikus aktivitása nagyobb, mint az egérből származó TNF-é. Az endotoxin meghatározását Limulus Amebocyte lizátummal (Microbiological Associates) végeztük. Mivel a klónozott egér histiocita sejtvonalak TNF-et termelnek, a normál és kóros humán histiociták vizsgálatát is célszerű elvégezni, a fenti sejtek hTNF termelésének meghatározása céljából, emberben. Az 1. táblázatban a B-sejtekkel kapott eredményekből arra következtethetünk, hogy a normál B-sejteknek is van hTNF- termelő képessége. 10 15 1. táblázat Vérképző humán sejtvonalak hTNF-termelő képességének vizsgálata Éld L-sejtek (%) in vitro Sejtvonal US) UR) PMA nélkül PMA jelenlétében PMAnélkül/PMA jelenlétében PMA nélkül PMA jelenlétében B-sejtek BE* 47 20 2,3 100 100 BI* 57 43 1,3 100 98 CL* 95 37 2,6 100 97 CW* 28 8 3,5 100 100 DE* 45 18 2,5 100 100 DM* 18 11 1,6 100 100 DS* 88 38 2,3 100 100 EJ* 27 16 1,7 100 100 EL* 70 16 4,4 100 100 EQ* 15 11 1,4 100 100 ER* 47 22 2,1 100 100 FC* 19 8 2,4 100 100 FD* 44 16 2,8 97 100 FG* 80 30 2,7 100 97 ARH-77 68 12 5,7 100 100 DAUDI 97 97-N.T. N.T. LuklI 20 13 1,5 100 100 RPMI1788 78 35 2,2 100 100 RPMI8226 96 84 1,1 100 86 RPMI 8866 32 10 3,2 100 98 SK-LY-16 98 100-100 100 SK-LY-18 99 100-100 98 ARA-10 77 39 2,0 100 97 BALL-1 100 100-100 100 T-sejtek CCRF-CEM 100 100 100 100 P-12 95 94-99 98 MOLT-4 100 100-99 96 T-45 100 100-100 100 5
