201578. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bottromycin A2 előállítására
11 HU 201578 B 12 A nyersterméket 170 g Kieselgel 60 (szemcseátmérő: 0,2-0,5 mm, Reanal, Budapest) adszorbenst tartalmazó oszlopon kromatografóljuk. Az elúciót 400 ml n-heptán-etil-acetát 1 : 1 eleggyel, majd 400 ml n-heptán-etil-acetét-aceton 1:1: 0,5 és 400 ml n-heptán-etil-acetát-aceton 1:1:1 elegyekkel, végül 800 ml n-heptén-etil-acetát-aceton 1:1:2 eleggyel végezzük. Az oszlopkromatográfiás frakciók antibiotikum tartalmát vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel analizáljuk [adszorbens: szilikagél G (Reanal, Budapest), kifejlesztő oldószer rendszer: kloroform-metanol (92 : 8) elegy]. Az oszlopról a bottromycin A2 n-heptán-etil-acetát-aceton (1:1:2) eleggyel oldódik le. A bottromycin A2-t tartalmazó frakciókat vákuumban bepárolva 1,06 g tisztított hatóanyaghoz jutunk. A kapott terméket 40 g Kieselgel 40 (szemcseátmérő: 0,063-0,2 mm, Reanal, Budapest) adszorbenst tartalmazó oszlopon tovább tisztítjuk. Az elúciót 100 ml kloroformmal, majd sorrendben 200 ml IX metanol, 400 ml 2X metanol, végül 200 ml 3% metanoltartalmú 5 kloroformmal végezzük. Az oszlopkromatográfiás frakciók antibiotikum tartalmát a fentiekben ismertetett módon analizáljuk. Az oszlopról a bottromycin A2 2% metanol tartalmú kloroformmal oldódik le. A bottromycin A2-t 10 tartalmazó frakciókat vákuumban bepárolva 0,75 g kromatográfiásan egységes bottromycin A2-t kapunk. A bottromycin A2 fizikai és spektroszkópiai adatai: 15 Op.: 140-145 °C Elemanalizis a C42H62NSO7S összegképletre (Ms = 822) számítva: C: H: N: S: számított: 61,29% 7,59% 13,61% 3,89% 2o talált: 61,14% 7,76% 12,92% 3,60% Infravörös spektrum, jellemző sávok (KBr, cm-*): 0 NH 3290, \> CH 2963, x) COOCHs 1742, 0 C0N< 1655. 13C-NMR spektrum (CDCb) 1H-NMR spektrum (CDCb) (ppm) DEPT (ppm) Intenzitás Multiplicitás CHz(5) 46,9-3,60-3,85 átfed“ átfed ■5. E a CH2(4) 30,3-1,65, 2,03 1H, 1H m 1 13 CH(3) 38,4 + 2,43 1H m V B 3-CH3 15,4 + 1,15 3H d co N , 00 1 CH(2) 65,5 + 3,87 átfed“ átfed 0 1 C=0(1) 171,05 ff WC-NMR spektrum (CDCb) (ppm) DEPT iH-NMR (ppm) spektrum (CDCb) Intenzitás Multiplicitás NH 7,75 1H d CH(2) 68,6 + 2,25 1H m ä CH(3) 26,8 + 2,75 1H m cd > 1 CHa(4) 19,6 + 0,67 3H d CH3(4’) 20,0 + 0,80 3H d C=0(1) 174,3 * 8
