201543. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-/(piperidin-4-il)-metil/-1,2,3,4-tetrahidro izokinolin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 201543 B 2 N° X Y Z R’ Só Olvadáspont (°C) 21 CH3O-6 CH3O-7-coc6h5-fűm. 138-139 22 H Cl-6-co C6H5-HC1 222-225 23 H Cl-6-ch2 C6H5-difum. 136-139 24 H Cl-8-co-CeHs-HC1 198-200 A találmány szerinti vegyületekkel elvégzett szá- 10 mos farmakológiai próba a vegyületek gyógyászati hatékonyságát igazolja. így olyan vizsgálatokat végeztünk, amelyek az 5-HTia típusú szerotoninerg receptorok iránti affinitás kimutatására alkalmasak. 15 A vegyületek patkány hippocampusában megszűntetik egy izotóppal jelzett specifikus ligandak, a [3H]-8-hidroxi-2-dipropil- amino-tetralinnak (a továbbiakban ,,[3H]-8-OH-DPAt”, amelyet Gozlan és munkatársai írtak le: Nature 305, 140-142, 1983) az 5- 20 HTia receptorokhoz való kötődését. 160-200 g tömegű hím Sprague-Dawley patkányokat használtunk a kísérletekhez. Fejlevágás után kiemeljük az agyat és kivágjuk belőle a hippocampust. A szövetet Ultra-Turrax Polytron készülékkel 30 má- 25 sodpercig homogenizáljuk sósavoldattal pH 7,4-re beállított 10 térfogat 50 mM Trisz-HCl-pufferben, a maximális sebesség felével (100 g friss szövet per ml). A homogenizált szövetet 4 eC-on háromszor mossuk, közben minden alkalommal 48000xg-vel 10 30 percig centrifugáljuk, és az üledéket friss hideg pufferben szuszpendáljuk. Végül az utolsó üledéket annyi pufferben szuszpendáljuk, hogy 100 mg kiindulási szövet legyen 1 ml 50 mM pufferben. Ezután 37 °C-on 10 percig inkubáljuk a szuszpenziót. 35 A (3H)8-OH-DPAT-vel való kötődés meghatározása céljából 10 |xl membránszuszpenziót 10 pM pargillint tartalmazó 1 ml végtérfogatú pufferben inkubálunk. Inkubálás után a membránokat Whatman GF/B szűrőkön gyűjtjük össze. A szűrőket 5 ml jéghideg 40 pufferrel háromszor átmossuk. A szűrőket szcintillációs folyadékba helyezve radioaktivitásukat folyadékszcintillációs spektrométerben határozzuk meg. A (3H)-8-OH-DPAT specifikus kötődését a szűrőkön visszamaradt radiokativitásként definiáljuk, amely gá- 45 tolható 10 pM 5-hidroxi- tripaminnal való együttes inkubálás útján. 1 nM (3H)-8-OH- DPAT koncentrációnál a fajlagos kötődés a szűrőn kimutatott összes radioaktivitás 70-80 %-át teszi ki. A vizsgált vegyületek minden koncentrációjánál 50 meghatározzuk a 3H/-8-OH-DPAT-hoz való kötődés gátlásának százalékát, majd a kötődést 50 %-kal gátló koncentrációt, azaz az IC50 értéket. A találmány szerinti vegyületek többségének IC50 értéke 0,001 és 0,3 pM közé esik, mint ez a következő 55 táblázatból kitűnik. Szám IC50(pM) Szám Cl50(pM) 1 0,0074 12 0,0045 2 0,0067 13 0,0023 3 0,0041 14 0,0022 4 0,035 15 0,0063 Szám ICsoOiM) Szám CIsoOiM) 5 0,028 16 0,0018 6 0,042 17 0,0020 7 0,032 18 0,0042 8 0,012 19 0,013 9 0,34 20 0,014 10 0,0015 21 1,0 11 0,0009 22 0,084 A találmány szerinti vegyületek centrális hatását macskán, a reszerpinnel indukált „PGO-csúcsok”-ra kifejtett hatás alapján (PGO-R teszt) értékeljük (PGO- csúcsok=ponto-geniculo-occioitalis csúcsok) Deporteore H. módszerével (Sleep 1976, 3. Európ. Congr. Sleep Res., Monpellier 1976, 358-361. oldal (Karger, Bázel, 1977). A vizsgálandó vegyületek kumulatív dózisait mesterségesen lélegeztetett kurarizált macskáknak (0,003-3 mg per kg, iv.) 30 perces időközökben adjuk be, 4 óra múlva 0,75 mg per reszerpin ip. injekciója után. Az elektroenkefalográfiás és fázisos aktivitásokat (PGO-R csúcsok) agykérgi és mély elektródok segítségével (oldalsó geniculum) határozzuk meg. A vizsgált vegyület minden dózisára kiszámítjuk a PGO- csúcsok számának százalékos csökkenését, majd az ED50 értéket, azaz a csúcsok számát 50 %-kal csökkentő hatásos dózist. A találmány szerinti vegyületek ED50 értéke 0,003 és 3 mg per kg közé esik iv. adás esetén. A próba eredményei azt mutatják, hogy az (I) általános képletű vegyületek in vitro erős és szelektív affinitást mutatnak az 5-HTia típusú szerotoninerg receptorok iránt. In vivo agonista, részlegesen agonista vagy antagosita hatást mutatnak e receptorok szintjén. így a találmány szerinti vegyületek az 5-HTai típusú szerotoninerg receptorokat közvetve vagy közvetlenül érintő betegségek kezelésére, nevezetesen depressziós, szorongásos állapotok, alvászavarok kezelésére, a táplékfelvétel szabályozására, valamint ér-, szívérrendszeri vagy agyérrendszeri betegségek, mint migrén és magas vérnyomás kezelésére használhatók. Ilyen célból megfelelő segédanyagokkal együtt orális vagy parenterális adagolásra alkalamas bármely formában előállíthatók és napi 1-1000 mg dózisban alkalmazhatók. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek és sóik előállítására, ahol X hidrogénatomot, metil- vagy metoxicsoportot, Y halogénatomot, metil- vagy metoxicsoportot jelent, és R jelentése -Z-R’ általános képletű csoport, amelyben 4
