201338. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azokat tartalmazó gyógyászati készítmények elöállítására
1 HU 201338 B 2 Találmányunk új peptidek és az e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik. Találmányunk tárgya eljárás (I) általános képletű peptidek [mely képletben X jelentése CO-R5; n értéke 1 vagy 0; R jelentése NH2C2H«-Gly; R1 jelentése Met vagy Nie; R2 jelentése Gly, Alá vagy (D)Ala; R3 jelentése Trp vagy Trp(CHO); R4 jelentése Thr(S03H) és R5 jelentése 1-3 szénatomos alkilcsoport] előállítására. Az aminosavakat a szokásos és közismert hárombetűs jelölés formájában adjuk meg. A leírásban az L-izomert értjük, feltéve, hogy mást nem közlünk. Az (I) általános képletű peptidek sói alkálifém- vagy alkáliföldfémsók (pl. nátrium-, kálium- vagy kalciumsók), ammóniumsók, alkil-amin-sók, (pl. di- vagy trietil-amin-sók) vagy savaddíciós sók (előnyösen hidrokloridok) lehetnek. Ezek előállítása azonban nem képezi a találmány tárgyát. Előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyekben X propionilcsoportot vagy különösen előnyösen acetilcsoportot (AC) képvisel és Y jelentése metil-amino-csoport vagy különösen előnyösen aminocsoport, továbbá Rl jelentése Met, R2 jelentése Gly és R4 jelentése Thr(S03H) és n értéke 0. Az (I) általános képletű vegyületek különösen előnyös képviselői az alábbi peptidek: Ac-Tyr(S03H)-Met-Gly-Trp(CH0)-Met-Thr(S03H)-(NCH3-Phe)-NH2, Ac-Tyr(S03H)-Nle-(D)Ala-Trp-Met-Thr(S03H)-(NCH3-Phe)-NH2, Ac-( NH2C2H4-Gly )-Tyr (SOsH )-Met-Gly-Trp(CH0)-Met-Thr(S03H)-(NCH3-Phe)-NH2 és különösen Ac-Tyr (SO3H )-Met-Gly-Trp-Met-Thr (SO3H )-(NCH3-Phe)-NHz. Az (I) általános képletű peptideket szilárdfázisú szintézis felhasználáséval állíthatjuk elő, például a J.A.C.S. 85, 2149 (1963) közleményben leírtak szerint. A szilárd fázisú szintézist a peptid C-végcsoportján kezdjük oly módon, hogy a védett oC-arainosavat amidkötéssel megfelelő gyantához [pl. benzhidrilamin (BHA) vagy metil-benzhidrilamin] kapcsoljuk. BHA gyantaként sztirol - 1% divinilbenzol kopolimert alkalmazhatunk, előnyösen csepp formában (200-400 mesh). A szilárdfázisú szintézis során a különböző aminosavcsoportok reakcióképes oldallánc-csoportjait a kémiai reakcióktól megfelelő védócsoportok segítségével megvédjük, majd a védócsoportokat végül eltávolítjuk. A karboxilcsoport védőcsoportjai közül pl. az észtereket, mint pl. arilésztereket (pl. adott esetben kis szénatomszámú alkil—, halogén-, nitro-, tio- vagy 1-7 szénatomos alkil-tio-helyettesítót hordozó fenilésztereket) említjük meg. Az oC-amino-csoportok tercier butoxikarbonil-csoporttal (Boc) védhetők meg. Az Asp, Ser, Thr oldalláncén levő csoportok benzilcsoporttal; a Trp oldallánccsoportjai formilcsoporttal; a Tyr oldalláncában levő csoportok 2,6-diklór-benzil-csoporttal; míg az amino-etil-glicin (NH2C2H4-Gly) oldallánccsoportjai benziloxikarbonilcsoporttal védhetők meg. A Boc-(NCH3-Phe)-t a BHA gyantához diciklohexil-karbodiimid (DCC) jelenlétében 0 °C-on kapcsolhatjuk: a megkötés (terhelés) aminosav-analízis szerint 0,20 millimól/g gyanta. A szintézis-ciklus tipikus esetét bemutató alábbi kísérleti jegyzőkönyvben a következő rövidítéseket alkalmazzuk: EDT = = 1,2-etán-ditiol; TFA = trifluorecetsav; DIPEA = diizopropil-etil-amin; DMF = dimetil-formamid. Lépés Reagens Idő 1. 1% EDT/CH2CI2 30 mp 2. 50% TFA(CH2Ch) 1 tömeg% EDT 1 perc 3. 1. lépést megismételni 4. 50% TFA(CH2Ch) 1 tömeg% EDT 15 perc 5. CH2CI2 30 mp 6. 2-propanol 30 mp 7-8. 5. és 6. lépést megismételni 9. CH2CI2 2x30 mp 10. 8% DIPEA 2x2 perc 11-15. 5-9. lépést megismételni 16. 5 ekvivalens Boc-aminosavanhidrid 30 perc 17. 1% DIPEA 5 perc 18-19. 6-9, lépést megismételni 20-21. 16-17. lépést megismételni, ha a kapcsolás a 19. lépés után teljes 22. 2-propanol 30 mp 23-24. 5. és 6. lépést megismételni 25. CH2CI2 30 mp 26. DMF 2x30 mp 27. CH2CI2 2x30 mp Az oldószereket az összes mosási és kapcsolási művelethez 10-20 ml/g gyanta térfogatban alkalmazzuk. A kapcsolásokat a Boc-aminosavak szimmetrikus anhidridjeivel végezzük el. A kapcsolásokat diklór-metánban 0 °C-on 15 perc alatt, 10 ekvivalens Boc-aminosav és 5 molekvivalens DCC felhasználásával hajtjuk végre. A teljes ciklusidő maradékonként 54-160 perc. A védócsoportok eltávolítását és a teljesen összekapcsolt peptid-gyanták hasítását fluor-hidrogénsavval, dimetil-szulfiddal és p-krezollal 0 °C-on hajtjuk végre. Az ily módon kapott nem-szulfatált peptideket preparatív HPLC (nagynyomású folyadékkromatográfia) úton tisztítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
