201335. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 6Ó, Ó-difluor-11ß, 17Ó-dihidroxi-16Ó-metil-4-pregnén-3,20-dion-származékok előállítására
5 HU 201335 B 6 ziseknél a végtermék hozamában többnyire jelentékeny veszteségeket okoznak. Az alábbi kiviteli példák a találmány közelebbi megvilágítására szolgálnak. Példa a) Egy polietilén edényben 180,7 g 3ű,17cC-dihidroxi-16oC-metil-5-pregnén-20-on 1445 ml toluollal készült szuszpenziójához keverés közben 0 °C hőmérsékleten 240,2 ml karbamid-folysav-reagenst (45:55 tömegarány) és azt követően kis adagokban 97,3 g N-bróm-szukcinimidet adunk oly módon, hogy a reakcióelegy hőmérséklete 0°-3 °C tartományban maradjon. A szuszpenziót további 2 órán keresztül 0 °C-on keverjük, majd 2 kg jég és 1441 ml 25%-os ammónium-hidroxid-oldat keverékéhez hozzáadjuk. A toluolt vizgőzdesztillációval eltávolítjuk, a vizes szuszpenziót 20 °C-ra lehűtjük, a reakcióterméket szívatással szűrjük és mintegy 700 ml vízzel jól átmossuk. A nedves terméket először 813 ml jégecetben, azután még kétszer 500- -500 ml ecetsavban szuszpendáljuk, leszívatva szűrjük és 30 °C hőmérsékleten levegő átáramlásos szárítószekrényben megszáritjuk. Kitermelés: 166 g 5oC-bróm-6£S-fluor-3/3,17oC-dihidroxi-16oC-metil-pregnán-20-on. Olvadáspont 183-185 °C (bomlás közben). b) 165 g 5oC-br0m-6ß-fluor-3ß,17oC-dihidroxi-16oC-metil-pregnán-20-on 1655 ml tetrahidrofuránnal és 58 ml vízzel készült szuszpenziójához 258 ml 8n krómsavoldatot adunk oly módon, hogy az elegy hőmérséklete 0°-2’°C között legyen és még két órán keresztül ezen a hőmérsékleten tovább keverjük. (A 8n krómsavoldatot úgy állítjuk elő, hogy 267,2 g króm(VI)-oxidot 230 ml tömény kénsavban oldunk és az elegyet vízzel 1000 ml-re felhígítjuk). A tetrahidrofurános szuszpenzióhoz ezután 15 ml 2-propanolt öntünk, további 10 percig keverjük, s a reakcióterméket 8,3 liter jeges vízre öntéssel lecsapatjuk. A csapadékot szívatással szűrjük és háromszor, egyenként 250 ml-es részletekben vízzel mossuk. A víztől nedves terméket 414 ml acetonban 15 percen át 20 °C-on erőteljesen keverjük, majd szívatással szűrjük és 50-50 ml acetonnal kétszer átöblitjük. Az 5cC- b róm-6/3-f luor-17oC- hi d roxi-16oC- metil-pre gnan-3,20-dion egy vákuumban óvatosan megszárított mintájának olvadáspontja bomlás közben lOö^llö °C. c) A nuccsnedves 5cí-bróm-6ű-fluor-17cC-hidroxi-16oC-metil-pregnán-3,20-diont 1655 ml ecetsavban felszuszpendáljuk, a szuszpenziót 30 °C-ra felmelegítjük és keverés közben 5,36 ml ecetsavban oldott 33 tömegszázalékos hidrogén-bromiddal elegyítjük. Hozzávetőlegesen 30 perc múlva az oldat kitisztul. Ezután még további 30 percig 30 °C hőmérsékleten keverjük. Ezt követően 35,1 g nátrium-acetátot adunk hozzá és az elegyet 6,62 liter jeges vízbe öntjük. Az igy kapott szuszpenziót 30 percen keresztül tovább keverjük, majd szívatással szűrjük, 250 ml vízben feloldott 17,5 g nátrium-acetáttal kétszer, majd 250 ml vízzel egyszer mossuk és 30 °C-on légátáramlásos szárítószekrényben megszárítjuk. Kitermelés: 123 g 6cC-fluor-17oí-hidroxi-16o(-metil-4-pregnén-3,20-dion. Olvadáspont 168- -184 °C (bomlás közben). Szilikagél lemezeken végzett vékonyréteg-kromatográfiás elválasztás után - 3 futtatás toluol/izopropanol 15:3 eleggyel - a reakciótermék mintegy 10% 6/3-fluor-izomert tartalmaz. d) Egy 2 literes Erlenmeyer lombikba 1 liter steril tápoldatot teszünk, amely 1% kukoricalekvárt és 1,25% szójaport tartalmaz és pH-ja 6,2-re van beállítva. Ezt a tápoldatot Curvularia lunata NRRL 2380 száraz tenyészetének egy „lemosatával", .leőblítményével' beoltjuk és a szuszpenziót 30 °C-on 72 órán keresztül, percenként 175-ös fordulatszámmal rázatjuk. Egy 50 literes fermentorba 30 liter steril tápoldatot töltünk, amely 1% kukoricalekvárt, 1,25% szójaport és 4 ml szilikon SH-t tartalmaz. A pH-t 6,5-re állítjuk be és a tápoldatot 1 liter Curvularia lunata inditótenyészettel beoltjuk és ezt az elptenyészetet 30 °C-on, a levegőztetést 2 m3/óra értékre beállítva 150 percenkénti fordulat mellett 18 óra hosszat inkubáljuk. Egy 50 literes fermentorba 30 liter steril tápoldatot töltünk, amely 1% kukoricalekvárt, 1,25% szójaport és 4 ml szilikon SÍI—t tartalmaz, s a pH-ját 6,5-re állítjuk be, majd 3 liter Curvularia lunata előtenyészettel beoltjuk, a tápoldat tetejére rárétegezve azt és 2 m3/óra ütemű átlevegóztetés és 150/perc fordulatszámú keverés mellett 5 órán keresztül 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután a tenyészethez 12 g (72,1%-os) 6o(-fluor-17oC-hidroxi-16cC-metil-4-pregnén-3,20-dion 600 ml etilénglikol-monometil-étei— rel készült oldatának steril szűrletét adjuk hozzá és az elegyet 35 órán keresztül tovább fermentáljuk. A szubsztrátum hozzáadása után a levegőztetés mértéke továbbra is 2 m3 levegő óránként, mig a keverés sebességét percenként 22ü-as fordulatszámra emeljük. e) A fermentáció sikeres befejezése után a tenyészlevet egyenként 20 liter metil-izobutil-ketonnal háromszor extraháljuk és a metil-izobutil-ketonos extraktumot rotációs vákuumbepárlóban legfeljebb 50 °C hőmérsékleten betöményítjuk. Az egész oldószermennyiség ledesztillálása után a maradékot 100 ml etil-aceláLban vízfürdőn történő melegítés közben felveszszük és a bepárlási maradék teljes feloldódása után az oldatot szobahőmérsékletre lehűtjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 D
