201335. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 6Ó, Ó-difluor-11ß, 17Ó-dihidroxi-16Ó-metil-4-pregnén-3,20-dion-származékok előállítására
7 HU 201335 B 8 A kikristályosodott anyagot Büchner-tőlcséren át leszivatjuk, etil-acetáttal leöblítjük és 50 °C vákuumszárító-szekrényben megszáritjuk. Ily módon 6,4 g ll/),17oC-dihidroxi-6cC- 5 -fluor-16oC-metil-4-pregnén-3,20-diont kapunk, 96%-os tisztaságban. Az anyalúgban kromatográfiásan még 1,5 g termék jelenléte határozható meg. f) 100 g 6aC-fluor-ll/),17oC-dihidroxi-16oC- 10 -metil-4-pregnén-3,20-diont 1050 ml száraz piridinben oldunk. Az oldathoz 25 °C hőmérsékleten 39,4 g N-bróm-acetaraidot adunk és az elegyet 15 percen keresztül keverjük. Ezután az elegyet 10 °C-ra lehűtjük és e 15 hőmérsékleten kéndioxidgázt vezetünk bele, amig a kivett próba megsavanyitott káliumjodid-oldattal keményitőpapíron negatív eredményt nem ad. Ezután 2100 ml vizet csepegtetünk 20 °C-on a piridines oldatba. Ezt kó- 20 vetően még 15 órán keresztül keverjük a rendszert jeges-vizes hűtés mellett. A kivált csapadékot leszűrjük, vízzel semlegesre mossuk és megszárítjuk. Ily módon 95,5 g 6oC-fluor-17oC-hidroxi-16cC-metil-4,9(ll)-pregnadi- 25 én-3,20-diont kapunk, amely diizopropil-éterbői történő átkristályositása után 219°-225 °C között olvad. g) 50 g 6oC-fluor-17oC-hidroxi-16cC-metil-4,9(ll)-pregnadién-3,20-dion nyerstermék 30 500 ml aceton és 100 ml víz elegyével készült szuszpenziójához hűtés közben 31,7 g N-bróm-szukcinimid oldatát csepegtetjük hozzá. 2 órán keresztül tovább keverjük a szuszpenziót. A reakció befejezte után a re- 35 akcióelegyhez 1,1 liter vizet adunk. A kiváló 9oC-bróm-6cC-fluor-ll/3,17cC-dihidroxi-16oC-metil-4-pregnén-3,20-diont leszűrjük, a kristályokat lemossuk és szárazra leszivatjuk. Egy megszárított minta olvadáspontja 138° és 40 143 °C között van, bomlás közben. Ezt követően a nedves 9oC-bróm-6oC-fluoi—ll/3,17oí-dihidroxi-16oC-metil-4-pregnén-3,20-dion kristályokat 400 ml metanolban felszuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 g nátrium-karbonátot 45 adunk és magasabb hőmérsékleten folytatjuk a keverést. Az elegyet szobahőmérsékletre hütjük és a 9,llß-epoxi-6oC-fluor-17oC-hidroxi-16a;-metil-4-pregnén-3,20-diont viz hozzáadásával leválasztjuk. A kristályokat leszűr- 50 jük, vízzel semlegesre mossuk és megszárítjuk. 41,3 g terméket kapunk, melynek olvadáspontja 210-214 °C. 50 g 9,ll/3-epoxi-6oC-fluor-17oC-hidroxi-16cC-metil-4-pregnén-3,20-diont 175 ml di- 55 klór-metánban felszuszpendálunk és hűtés közben 175 ml 45:55 (tömegszázalék) karbamid-folysav reagenst adunk hozzá. Ezután még 2 óráig szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. 500 ml jeges viz hozzáadása után 60 tömény szalmiákszesszel semlegesítjük és a diklór-metánt vízfürdőn ledesztílláljuk. A reakcióterméket leszivatjuk, a kristályokat vízzel mossuk, 50 °C-on légátáramlásos szárítószekrényben megszárítjuk és diklórme- 65 tán/metanol elegyból átkristályositjuk. Ily módon 38 g 6oC,9ut-difluor-llfl,17o(-dihidroxi-16oC-metil-4-pregnén-3,20-diont kapunk, amely bomlás közben 254-258 °C hőmérsékleten olvad. h) Egy 2 literes Erlenmeyer lombikba 1 liter steril tápoldatot töltünk, amely 0,05% glükózt, 1,0% élesztőkivonatot, 0,5% kukoricalekvárt és 4 ml szilikon SH-t tartalmaz és amelynek a pH-ját 7,0-ra állítjuk be. Ezt a tápoldatot Bacillus lentus ATCC 13805 felülúszójával beoltjuk, s a tenyészetet 30 °C-on 48 órán keresztül 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. Egy 50 literes ferinentorba, amelybe 30 liter, 0,05% glükózt, 1,0% élesztőkivonatot, 0,5% kukoricalekvárt és 4 ml szilikon SH-t tartalmazó, 7,0 pH-jú, steril tápoldatot töltünk, azt a Bacillus lentus inditótenyészetének 1 literével oltjuk be. Ezt az előtenyészetet 30 °C-on 2 m3/óra mértékű átlevegőztetés és 220 percenkénti fordulatszámú keverés mellett 24 óra hosszat inkubáljuk. Egy 50 literes fermentorba 30 liter steril tápoldatot töltünk, amely 0,05% glükózt , 1,0% élesztőkivonatot, 0,5% kukoricalekvárt és 4 ml szilikon SH-t tartalmaz. A tápoldat pH—ját 7,0-ra állítjuk be és 3 liter Bacillus lentus elötenyészettel beoltjuk úgy, hogy azt rárétegezzük, és óránként 2 m3 levegő átboesátása és percenként 300-as fordulatszámú keverés mellett 30 °C-on 6 órán át inkubáljuk. 3 g 6oC,9oC-difluor-llű,17cC-dihidroxi-16üt-metil-4-pregnén-3,20-diont 300 ml 2-metoxi-etanolban feloldunk, az oldatot a fermentorban lévő inkubátumhoz hozzáadjuk, majd azt még további 12 órán át fermentáljuk. A fermentáció sikeres befejezése után az 1%-os vizes formaldehid oldattal sterilizált tenyészlevet háromszor egyenként 20 liter metil-izobutil-ketannal extraháljuk és a metil-izobutil-ketonos extraktumot rotációs vákuumbepárló berendezésben legfeljebb 50 “C hőmérsékleten betöményítjük. Az egész oldószermennyiség ledesztillálása után a maradékot 100 ml etil-acetátban vesszük fel vízfürdőn való melegítés közben, és a bepárlási maradék teljes feloldódása után az oldatot szobahőmérsékletre hütjük. A kivált kristályokat Büchner-tölcséren át leszivatjuk, etil-acetáttal mossuk és vákuumszáritó szekrényben 50 °C-on megszárítjuk. Ily módon 2,6 g 6tf ,9oC-difluor-llé>17a-dihidroxi-16DC-metil-l,4-pregnadién-3,20-diont kapunk. i) 10 g 6oí,9oí-difluoi—llé,17of-dihidroxi- 16oC-metil-l,4-pregnadién-3,20-dion 80 ml metanollal készített szubszpenziójához nitrogéngáz atmoszférában, 25 °C-on keverés közben 10 ml telített metanolos kaleiumklorid-oldatot és 5,4 g kalcium-oxidot adunk hozza. 1,5 órán belül ehhez az elegyhez 21,6 g jód és 3,2 g kalcium-klorid 62 ml metanollal készült oldatát adjuk hozzá és 25 °C'-on 3 órán keresztül tovább keverjük a reakcioelegyet. Ezután az elegyet 300 ml jeges vízbe öntjük, 6
