201332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortartalmú 2-izoxazolinok és -izoxazolok, valamint ilyen vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
57 HU 201332 B 58 Vivőanyag: foszfát-pufferolt konyhasó-oldat 8 g/1 nátrium-klorid 0,2 g/1 kálium-klorid 1,44 g/1 dinátrium-hidrogén-foszfát'2H20 0,2 g/1 káliura-dihidrogén-foszfát 8. táblázat Késleltetett típusú hiperszenzitiv reakció stimulációja Vegyület (előállítási példa száma) Egyszeri kezelés hatására fellépő relativ stimuláció %-ban 40 mg/kg i.p. 34. 100 27. 94 30. 76 35. 98 36. 102 37. 77 39. 136 53. 68 61. 108 62. 83 6. Nem-specifikus immunitás stimulálása - Mononukleáris fagociták aktiválása A makrofágok valamennyi immunreakciónél, beleértve a fertőzések elhárítását is, központi szerepet játszanak. Egyrészt magára a kórokozók eliminációjára is hatással vannak, másrészt a humorális (B-sejt-függő) és sejtes (T-sejt-függő) immunrendszer szabályozásánál ellenőrző szerepet töltenek be. A vizsgálat során a találmány szerinti vegyületeknek a peritoniális makrofágokra kifejtett stimuláló hatását vizsgáltuk 6-8 hetes Naval Medical Research Institute eredetű nőstény egereken. Az állatokat 5, 10, 20 és 40 mg/kg dózisokkal párén te rálisan vagy orálisan kezeltük. A kontroli-csoport állatai fiziológiás sóoldatot kaptak. A kezelés után 3 nappal megvizsgáltuk az állatok peritoniális makrofágjait a lysosoraális enzimek kiválasztása és kemiluinineszcencia alapján, amely az oxidációs anyagcsere kapacitásának mértékét jellemzi. Erre a célra 1 ml TC 199 táptalajt tartalmazó 3 cm átmérőjű Petri-csészókben 3 x 106 makrofégot vagy pedig 0,1 ml táptalajt tartalmazó gömbölyű aljú polietilén-csövecskékben 37 °C-on 5% szén-dioxid-tartalmú atmoszférában 106 niakrofagot tenyésztettünk. Egy óra eltelte után a kultúrákat vízzel mostuk, hogy az úszó sejteket eltóvolítsuk, majd meghatároztuk csövecskékben lévő kultúrák kemilumineszcenciáját. A Petri-csészékben lévő kultúrákat, további 24 óra hosszat 37 °C-on tartottuk és végül az aktivitás meghatározását az exozytozok által felszabadított lysozom enzimek mérésével végeztük. A vizsgálatok azt mutatták, hogy az (I) általános képletű vegyületek intraperitoniális és orális kezelés mellett is stimulálják a makrofág-aktivitást és ezáltal immunitást erósitő hatást fejtenek ki. így például a dóziskereséshez gyakran alkalmazott 34. példa szerint előállított vegyület a 9. táblázat tanúsága szerint mindkét kezelési mód során markáns, dózisfüggö kemilumineszcencia-növekedést mutatott, ami az oxidációs makrofág anyagcsere erőteljes oxigén-gyök-képződéssel és ezáltal megnövekedett fényemisszióval járó aktiválásának következménye. 9. táblázat .4 peritoniális makrofágok hatása az oxidációs anyagcserére egereken Vizsgálati anyag Dózis mg/kg Kemiluinineszcencia relatív fényegység/15 perc x 103 i.p. per os Vivőanyag 7. táblázat 368 ± 31 359 ± 48 szerinti 34. példa 5 842 ± 42 728 ± 101 szerinti 10 2842 ± 223 2140 = 156 vegyület 20 4935 ± 516 3286 i 283 40 6990 ± 290 4405 i 197 5 10 15 20 25 30 35 40. 45 50 55 60 31
