201117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil-(2,3-epoxi-1-propil)-éterek sztereospecifikus előállítására
9 HU 201117 B 10 5. példa AllH-[4-(2-nieloxi-etil)-fenilJ-éter átalakítása Pseudomonas putida NC1B 9571-gyel (+)-glicidil-[4-(2-meloxi-etilhfenil]-éterré, majd ennek átalakítása (-)-metoprolollá. 200 ml (a 3. példában leirtak szerint készített) Pseudomonas putida NCIB 9571 sejtszuszpenziót 1 g allil-(4-(2-metoxi-etil}-fenil]-éterrel 30 °C-on 24 óra hosszat inkubálunk, utána diklór-metánnal extraháljuk, és (a 3, példában leirtak szerint) tisztítás után 324 mg (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-étert kapunk; [oCJ^d = +6,42° (c = 0,88; etanol). Az Eu(hfc)3 europium shift-reagens jelenlétében (az 1. példa szerint) protonmágneses rezonanciaspektroszkópióval mért optikai tisztaság 100% a protonmágneses rezonanciaspektroszkópiás mérések kísérleti hibáin belül. 214 mg (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-étert (a 2. példában leírtak szerint) izopropil-aminnal kondenzálva 146 mg (-)-metoprololt kapunk, amelynek olvadáspontja 44- -46 °C; [oé]25d = -5,00° Cc = 1,01; etanol). Az optikai tisztaság (a 2. példában leírt módszer szerint) 98%-nak bizonyul. Az anyalúg bepárláséval 9 mg 97,5%-os optikai tisztaságú (-)-metoprololt kapunk. 6. példa Allil-[4-(2-metoxi-etiD-fenil]-éter átalakítása Pseudomonas oleovor&ns ATCC 29347-tel (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éterré, majd ennek átalakítása (-)-metoprolollá. 200 ml Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 sejtszuszpenziót (amelyet a 3. példában leirtak szerint készítünk) 2 g allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éterrel 30 °C-on 5 óra hosszat inkubálunk. Diklór-metánnal végzett extrakció és szilikagélen (az 1. példa szerint) végzett tisztítás után 289 mg (+)—glicidil—[4—(2— -metoxi-etil)-fenil]-étert kapunk; [oC]25d = = +8,02° (c = 1,16; etanol). Az Eu(hfc)a europium shift-reagens jelenlétében (az 1. példa szerint) protonmágneses razonanciaspektroszkópiával mért optikai tisztaság a protonmágneses rezonanciaspektroszkópiás mérések kisérleti hibáin belül 100%. 171 mg (+)-glicidil-|4-(2-metoxi-etil)-fenil)-étert (a 2. példában leírtak szerinti módszerrel) izopropil-aminnal reagáltatva 154 mg 44-45 °C olvadáspontú (-)-metoprololt kapunk; fof]2^ = -5,27° (c = 0,967; etanol). Az optikai tisztaság az S-leucil-diasztereomer-származékok (2. példa szerinti) nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás vizsgálata alapján 98,4%. Az anyalúg bepárlásával 6 mg 92,2%-os optikai tisztaságú (-)-metoprololt kapunk. 7. példa Allil-[ 4- (2-metoxi-etil)-fenil]-éter mikrobiológiai átalakítása (+)-glicidil-[4~(2~metoxi-etil)~ -fenilj-éterré. 50 ml ásványi sós táptalaj, 0,05 ml Tween 80, 0,05 ml tetradekán és 0,05 ml allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter elegyét inokuláljuk vagy Nocardia corallina ATCC 31338-cal vagy Rhodococcus sp. NCIB 11277-tel vagy Mycobacterium rhodochrous NCIB 9703-mal (melyeket előtte 72 óra hosszat 0,5% tetradekánon tenyésztünk), majd 30 °C-on inkubáljuk. Mintákat veszünk 24 óra és 96 óra után, diklór-metánnal extraháljuk, és gázkromatográfiával (GC) analizáljuk. A glicidil—14- (2-metoxi-etil )-fenil]-éternek megfelelő csúcsokat az egyes esetekben meghatározva a következő konverziókat kapjuk: Mycobacterium rhodochrous 24 óra múlva 2%; Rhodococcus sp. 96 óra múlva 1% és Nocardia corallina 96 óra múlva 5%. A szerkezet további bizonyítását úgy kapjuk, hogy egy Nocardia corallina felhasználásával (500 ml tenyészet, körülmények az előbbiek) végzett pontosan bemért kísérleti tenyészetet diklór-metánnal extrahálunk, majd szilikagélen tisztítjuk, és protonmágneses rezonanciaspektroszkópiával analizáljuk. A glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter europium shift-reagens jelenlétében felvett protonmágneses rezonanciaspektrum 100%-os optikai tisztaságot bizonyít, és azonos a Rhodococcus equi-vel kapott (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter europium shift-reagenssel felvett protonmágneses rezonanciaspektrumával. 8. példa Allil-fenil-éter átalakítása Mycobacterium NCIB 11626-tál (+)-fenil-glicidil-éterré, majd ennek átalakítása (-)-3-fenoxi-l-(izopropil-amino)-2-propanollá. Folytonos tenyésztési körülmények: 2,7 literes tenyészet-térfogat; AM2 táptalaj [amely 1,45 g/liter ammónium-szulfátot, 1,0 g/liter foszforsavat, 0,099 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,015 g/liter kalcium-klorid-dihidrátot, 2 ml/liter TK3 nyomelem-oldatot, 1 ml/liter 0,1 mólos vas(II)-szulfát-heptahidrát oldatot tartalmaz]; szénforrás: 25 ml/perc etilén; levegő: 300 ml/perc; keverő sebessége: 280 ford/perc; hőmérséklet: 28 °C; pH = 6,8; higítási sebesség: 0,02/óra (um = kb. 0,03/óra). Ezek a körülmények körülbelül 3,2 g/liter szárazsúly biomassza szintet biztosítanak. A sejteket felhasználás előtt általában centrifugálással koncentráljuk, majd a megadott közegben reszuszpendáljuk. A fenil-glicidil-étert gázkromatográfiával analizáljuk (oszlop és körülmények az előbbi 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
