201117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil-(2,3-epoxi-1-propil)-éterek sztereospecifikus előállítására
5 HU 201117 11 6 részleges Protonmágneses rezonanciaspektrumait ábrázolják, l.a) ábra: (±1- vagy (+)-glicidil-(4-(2-metoxi-etil)-fenilj-éter shift-reagens nélkül. l.b) ábra: (i)-Glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fe-nil]-éter E« (hfcl.i reagenssel. Eu(hfc)3 és (±)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter aránya = 0,10. 1. c) ábra: ( + )-Glicidil-[4-(2-nietoxi-etil)-fe-nil]-éter Eu(hfc)a reagenssel. Eu(hfc>3 és (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter aránya = 0,12. 2. ábra: (-1-Metoprolol protonmágneses rezonanciaspektruma. 3. ábra: (-)-Metoprolol C. I. (ClU)-gyel meghatározott tömegspektruma. 4. ábra: Fenil-glicidil-éter előállítása Mycobacterium WMl-gyel nagy méretben (2,25 liter) kétfázisú rendszerben. f750 ml sejt (6,9 g/liter száraz súly) + 1500 ml 2,5% allil-fenil-étert tartalmazó izooktán]. Az ábrán a fekete négyzetek a fenil-glicidil-éter koncentrációt mutatják az izooktán rétegben. A körök a párhuzamosan végzett kontrolikísérletben (4 ml sejt + + 10 ml 2,5% allil-fenil-étert tartalmazó izooktán) keletkező fenil-glicidil-éter koncentrációját mutatják. 5. ábra: (-)-3-Fenoxi-l-(izopropil-amino)-2--propanol protonmágneses rezonanciaspektruma. 6. ábra: (-)-3-Fenoxi-l-(izopropil-amino)-2--propanol C. I. ÍCH^J-gyel felvett tömé gs pe k tr u ma. 1. példa Allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter átalakítása (+)-glicidil-[ 4-( 2-metoxi-etil )-fenil]-éterré Rhodococcus equi NCIB 12035-tel. Rhodococcus equi NCIB 12035 30 °C-on 1 ml tetradekánon 0,02% élesztókivonatot tartalmazó 100 ml ASM ásványi sós táptalajon növesztett 72 órás tenyészete biomasszájának körülbelül a felét átvisszúk egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikba, amely 0,02% élesztőkivonatot tartalmazó 50 ml, ASM táptalajt, 0,15 ml tetradekánt, 1 ml oktánt, 0,05 ml Tween-80-t és 0,05 ml alli)-| 4-(2-metoxi-etil)-fenil]-étert tartalmaz. A lombik tartalmát 30 °C-on körkörös rázógépen inkubáljuk, és mintákat veszünk, amelyeket diklór-metánnal való extrahálás után Varian 3700 gázkromatográfon analizálunk. (Oszlop: 3% OVI WHP 100-120-on; 50 cm hossz; 2 mm belső átmérő; 100 °C-tól 200 °C-ig 10 °C/perc; Nz 30 ml/perc). ASM táptalaj: 0,535 g/liter ammónium-klorid; 0,531 g/liter kálium-dihidrogén-foszfát; 0,866 g/liter dinátrium-hidrogén-foszfát; 0. 174 g/liter kálium-szulfát; 0,037 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrát; 0,00735 g/liter kalcium-klorid-dihidrát; 1,0 ml/liter TK3 5 nyomelem oldat és 1,0 ml/liter 0,1 mólos vas(Il)-szulfát-heptahidrát oldat. A TK3 nyomelem oldat 0,288 g/liter cink-szulfát-heptahidrátot, 0,224 g/liter mangán-szulfát-tetrahidrátot, 0,0618 g/liter bór- 10 savat, 0,1248 g/liter réz-szulfát-pentahidrátot, 0,0484 g/liter nátrium-molibdenát-dihidrátot, 0,0476 g/liter kobalt) II )-klorid-hexahidrótot, 0,083 g/liter kálium- jodidot és 1 ml/liter 1 mólos kénsavoldatot tartalmaz; 15 pH = 7,0. A termék, a (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter 48 óra inkubálás után jelenik meg, és 96 óráig növekszik a mennyisége, amíg az epoxid körülbelül a megmaradó 20 allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter mennyiségének körülbelül 15%-át éri el. Megfelelő mennyiségű (+)—glicidil—[4— (2— -metoxi-etil)-fenil]-éter összegyűjtése céljából 10 x 50 ml és 5 x 500 ml (előbb leírt 25 körülmények között készített) tenyészetet 350 ml diklór-metánnal extrahálunk. Az extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, az oldószert ledesztilláljuk, és az epoxidot szilikagélen hexán/dietil-éter gradienssel eluálva 30 tisztítjuk. A 30% dietil-étert tartalmazó elegy eluálja az epoxidot. Ily módon 353 mg (+)-glicidil- [4- (2- me toxi-e til )-f enil ]-éter t kapunk. [dCJ^d = +8,11° (c = 0,95; etanol). A ( + )-glicidil-! 4-(2-metoxi-etil)-fenil]-35 -éter optikai tisztaságát protonmágneses rezonanciaspektroszkópiával vizsgáljuk trisz(3- -(heptafluor-propil-hidroxi-metilén)-d-kámforato]-európium(III) [Eu(hfc>3] shift reagens jelenlétében (lásd 1. ábra). A shift reagens 40 hozzáadására a kémiailag szintetizált (±)-glicidil—[ 4— (2-metoxi-etil )-fenil ]-éterben lévő egyes geminális protonokból származó jelek burkoló görbéje (lásd l.a. ábra (a) és (b) jelzése] lefelé eltolódik, és mindegyikük két 45 egyenlő intenzitású sávra hasad fel [lásd 1. b. ábra (a) + (b)]. A mikrobiológiailag előállított (+)—glicidil—[4- (2-metoxi-etil )-fenil]~ -éterben lévő geminális protonok mindegyikéből ugyanilyen körülmények között azon-50 ban csak egy jelgörbe észlelhető (lásd l.c. ábra (a) + (b)j. így a mikrobiológiai epoxidálással kapott (+)-glicidil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter optikai tisztasága a protonmágneses rezonanciaspektroszkópiás mérések kí- 55 sérleti hibáján belül 100%-nak vehető. 2. példa 60 (+)-ülicidil-[4-(2-metoxi-etii)-fenill-éter átalakítása (-)-metoprolollá. 290 mg (+)-glicidil-(4-(2-metoxi-etil)-fenil]-éter (lásd 1. példa) 6,2 ml vízmentes 65 etanollal és 1,84 ml izopropil-aminnal készi-5
