201099. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 40926 antibiotikum mannozil-aglikon és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
3 HU 201099 B 4 D) retenciós idő (Bt) 1 (18 az L 17054 antibiotikmuhoz (TA3-1) viszonyítva (Rt = 8,78 perc), az elemzést fordított fázisú HPLC-vel a kővetkező körülmények között végezve: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 mm) A eluálószer: CHsCH 10% NaHzP04.Hz0 (2,5 g/1) 90% pH 6,0-ra beállítva B eluálószer: CHaCN 70% NaHzPCh.HzO (2,5 g/1) 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris gradiens (5%-60% B eluálószer A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,6 ml/perc UV detektor: 254 mm belső standard: L 17054 antibiotikum (TA3-1) (Gruppe Lepetit S. p. A.) E) Rf érték 0,39 a következő kromatográfiás rendszerben: 5 g/1 NaH2P04.H20-t tartalmazó 1M NaCl 70 acetonitril 30 pH 6,0-ra beállítva, szilanizált szilikagél lemezeket - szilikagél 60, F254 Merck lemezek, rétegvastagság 0,25 mm - alkalmazva Kimutatás:- UV fény- sárgaszín Pauly reagenssel, azaz diazotált szulfanilsavval (J. Chromatog. 20, 171, 1965; 2. Physiol. Chem. 292, 99, 1953)- bioautográfia B. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával minimális Davis táptalajon F) gyors atombombázásos (FAB) tömegspektrum, amelyben M + M* kb. 1374-nél helyezkedik el. A Davis táptalaj összetétele: 1000 ml vízben 1 g (NH4)2S04, 3 g KH2PO4, 7 g K2HPO4, 0,5 g Na-citrát, 0,1 g MgSCh, 10,0 g glükóz és 15,0 g agar; pH 7). A fizikokémiai jellemzők alapján és az ugyanebbe az osztályba sorolható ismert antibiotikumok szerkezetére vonatkoztatva az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikonnak olyan előbbi (I) általános képlet tulajdonítható, amelyben A jelentése hidrogénatom és B jelentése mannozil-csoport. Az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikont úgy állítjuk elő, hogy az A 40926 antibiotikum komplexet, az A faktorban és B faktorban feldúsult A 40926 antibiotikum komplexet azaz az AB komplexet, vagy az A, B, Bo, PA vagy PB faktort vagy ezek keverékeit ellenőrzött reakciókörülmények között savas hidrolízisnek vetjük alá. Ezeket az ellenőrzött savas körülményeket egy ásványi sav vagy erős szerves sav tömény vizes oldata biztosítja, amelyhez előnyösen egy aprotikus szerves oldószert adagolunk. Az ásványi savakra kitüntetett példa a kénsav vagy a foszforsav. Kitüntetett erős szerves sav a trifluorecetsav. Kitüntetett aprotikus szerves oldószerek az aliciklusos vagy ciklusos alkil-éterek (pl. a dioxán és a tetrahidrofurán), a rővidszénláncú alkil-szulfoxidok (például a dimetil-szulfoxid) és a rövidszénláncú alkil-amidok (például a dimetil-formamid). A reakció hőmérsékletét általában 0 °C és a reakcióelegy visszafolyatási hőmérséklete között tartjuk. Számos esetben ez 15 °C és 75 °C között helyezkedik el, mig a kitüntetett hőmérséklet 20 °C és 55 °C között választható meg. Legelőnyösebb a szobahőmérséklet. A reakcióidő a reakció konkrét paraméterei függvényében változik és mivel a reakció lefolyása TLC vagy HPLC technikával követhető, a szakember képes a reakció előrehaladásának követésére és annak eldöntésére, hogy a reakció befejezettnek tekinthetó-e. A találmány szerinti eljárás egy kitüntetett foganatositási módját képviseli az A 40926 antibiotikum komplex vagy egy tiszta faktora ellenőrzött hidrolízise - az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon előállítására - 80-95%-os vizes trifluorecetsav jelenlétében, szobahőmérsékleten. A találmány szerinti eljárás egy másik kitüntetett foganatositási módját képviseli az A 40926 antibiotikum komplex ellenőrzött hidrolízise, 1-2 n vizes kénsav és dioxán 2:1-1:2 arányú elegye jelenlétében. A hidrolízis-lépés végén kinyert nyers A 40926 antibiotikus mannozil-aglikon tisztítása önmagukban ismert eljárások szerint végezhető, amilyen pl. a nem-oldószerek hozzáadása, kicsapás céljából, vagy az oldószeres extrakció és a kromatográfia. A kitüntetett kromatográfiás eljárások közé tartozik az oszlopkromatográfia és a legkisebb kitüntetett kromatográfiás eljárás a fordított fázisú oszlopkromatográfia. Egy megfelelő fordított fázisú folyadékkromatográfiás eljárás során előnyösen saválló acél oszlopot alkalmazunk mérsékelt nyomáson (5-105-5-106 Pa) vagy nagy nyomáson (107-2-107 Pa). A szilárd fázis lehet egy szilanizált szilikagél, 2-18 szénatomos (legelőnyösebben 18 szénatomos) szénhidrogén-fázissal vagy fenilcsoporttal, az eluálószer pedig egy poláris, vízzel elegyedő oldószer és a gyantával összeférhető pH-jú (előnyösen pH 3-8) vizes puffer elegye. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
