201098. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyűrűs peptidek, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

17

HU 201098 B

18

= 0,15 nmól) és szövethomogenizátummal (striátium 0,26 mg fehérje, 2 ml végső térfogat; pankreász 0,165 mg fehérje 1 ml végső térfogatban) kombinálunk.

A mintákat 30 percen át 25 °C-on inku- ® báljuk és az inkubálást oly módon fejezzük be, hogy az elegyet Sandbeck-féle többszörös vákuumszűrőn előnedvesitett Whatman GF/B szűrőre öntjük. Az inkubációs csöveket 2x3 ml jéghideg HEPES 2. pufferrel mossuk, "!í> majd a mosófolyadékot GF/B szűrőn átszűrjük. A szűrőt levegőn 10 percen ót szárítjuk, majd 12 ml Beckman HP/b .Ready-Solv' szcintillációs cocktaillel együtt szcintillációs fiolába helyezzük. A fiolákat 2-12 órán ót rá- 15 zatjuk, majd Beckman 7800 folyadékszcintillóciós spektrofotométerrel mérjük a szcintilléciót. A nem-specifikus kötődést 1 jjmól természetes CCK-8 jelenlétében meghatározzuk és a specifikus kötődés meghatározása céljá- 20 ból az összes mintából levonjuk. Az összes specifikus 3H-CCK-8-(S03H) kötődés 50%-os gátláshoz szükséges peptid-koncentróciót (ICso) a log-probit analízissel határozzuk meg. 25

Az eredményeket az I. táblázatban foglaljuk össze.

(O

(0-tó

N

tó

M

CD

&

1

rH

&

Z

co

rH

Mi-H

+1

+1

M

■H

$

*4)-tó

tó

1

CT)

CO

co

m

T—4

co

>

CM

rH

rH

O'

rH

rH

rH

rH

%

2

“S

5

(fi

■s

tó

0

u

c

o

c—

i—4

o

»-*4

i

m

8

c—

&

rH

a-tó

X

*3

+1

+1

+i

■h

■H

H-tó

CCM

CM

CO

iH

CM

r*»

H

in

C(0 «o

Q 3

1

2 * u rrt

E _

3«

.3 s-4.6

3000

rH

§

o

o

00 § IM P3

t. c

—

rH

/\

rH

A

CO

10

W CM

co co

O

CM O lO

o o o

CM CM CM

CO CO co

CO

\

o

o

in

O

O

o

o

•o

3

cd

2 N-o g

Cl t O (0

CM CO

tó

'3

c

tó

>

Mi

tó

N

(fi

♦rH

ft

tó

ft

CO

1

CM

ÍN

X

X

o

CM

z

z

ü

X

1

1

tó

tó

1

X

X

M

tó

ft

ft

X

2

X

ft.

•rH

ri.

•rH

4-»

tó

X

rH

x>

tó

B

tó

B

a.

i

tó

B

i

z

i

X

ft

(0

<

«

Z

i

i

i

i

5

A

a;

s

ft (fi - <

l.

o

co

X»

o

co

«r'

*4

1

ft

H)

tó

2

X

E-<

1

.c

e-1

E-1

i

ft

4->

tó

■

>>

u

X

3

l

i

a

\

ft

a

i

(4

u

tó

rH

ü

H

X

1

(0

1

js

i

>>

S3

J

X

3 ***

3

i

Ő

■L

tó

4-3

tó

CO

X

n

s

X

u

o

i

co

X

X

E-*

«

«

1

o

O

ft

co

CO

(fi

Eh

<

t

T

E

1

O

>» -X

<

H

E-»

11

A megfelelő kontrolitól szignifikánsan eltérő érték: ”“ps0,001,

»piO.Ol,

xp£0,05

N.S. = nem szingifikáns