200942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dipiridamolt, illetve dipiridamolt és interferont tartalmazó, daganatok kezelésére alkalmas gyógyászati készítmény előállítására
HU 200942 B ból előnyös, hatékony dipiridamol plazmaszintnek közülbelül a 0,1 (iM-t (50 ng=ml) tekintjük, a kezelés szempontjából hatékony interferon plazmaszint pedig körülbelül 10 NE/ml. Mind a dipiridamolnak, illetve sóinak, mind pedig az interferonoknak ajánlott dózisait a fent ismertetett plazmaszintek alapján állapíthatjuk meg. Nyilvánvalóan az aktuális dózisokat a kezelőorvos módosíthatja, az egyes betegek kezelési körülményeitől, illetve állapotától függően. A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmény gyakorlati alkalmazása során az interferon adagolása történhez parenterálisan. A dózisok, illetve dózistartományok előnyös körülbelül 1 x 106 és 10 x 106 NE közé esnek; intravénás alkalmazás esetén naponta kétszer, előnyösen 1 x 106 és 3 x 10° NE közé, intramuszkuláris adás esetén a kezelés napi egy alkalommal történik. A humán interferonok előnyös dózisformáit tartalmazó készítmények jól ismertek. Parenterális alkalmazásra megfelelő adagolási forma előállítása érdekében szükséges mennyiségű HuIFN-t oldunk fel 5%-os humán szérum-albuminban, mely szükség esetén tartalmazhat valamely megfelelő pufferoldatot is. Az így keletkező oldatot ezt követően bakteriológiai szűrőn juttatjuk keresztül, majd az így nyert, megszűrt oldatot steril körülmények között ampullákba töltjük. Valamennyi ampulla megfelelő mennyiségű interferont tartalmaz, szükség esetén liofilizálva. Az üveg-ampullákat felhasználás előtt előnyösen lehűtött körülmények között (-20 °C-on) tároljuk. Az interferonok ismert módon feldolgozhatók gyógyszerészetileg felhasználható készítményekké oly módon, hogy az interferont valamilyen, gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyaggal keverjük össze: a hagyományos vivőanyagok és az előállítás tekintetében hivatkozunk az E.W. Martin által leírtakra (Remington: Pharmaceutical Sciences). A dipiridamol, illetve annak valamely sója alkalmazható bármely szokásos adagolási eljárás segítségvei, például perorális vagy parenterálisan. Jelenleg az előnyös adagolási mód a perorális alkalmazás. Az ajánlott dózis naponta kétszer 25-100 mg, előnyösen 30-60 mg. Szükség esetén azonban 10-20 mg dipiridamol is alkalmazható egyszeri dózisként, melyet intravénásán adunk be, az interferonnal azonos órában. A dipiridamol a kereskedelmi forgalomban a védjegyzett Persantin márkanéven szerezhető be, számos adagolási formában. A 10 mg dipiridamolt tartalmazó injekciós oldatot és a 25 mg, illetve 75 mg dipiridamolt tartalmazó drazsét például a Rote Liste 1987-es kiadása ismerteti. A kötet a Bundesverband der Pharmazeutischen Industrie e.V., D- 6000 Frankfurt a.M., NSZK kiadásban jelent meg. Standard eljárások segítségével különböző dipiridalom-mennyiségeket tartalmazó megfelelő adagolási formák állíthatók elő. Az irodalom ezen kívül számos speciális, galenusi készítményt is ismertet, melyek célja gyorsított vagy késleltetett (elhúzódó) dipiridamol-hatóanyagleadás, illetve felszívódás biztosítása. Ilyen például a 0.032.562 közzétételi számú európai szabadalmi bejelentésben ismertetett retard típusú kapszula, illetve a 0.068.191 köz5 zétételi számú európai szabadalmi bejelentésben ismertetett, azonnali hatóanyagleadást biztosító készítmény. Egy további, késleltetett hatóanyagleadású galenusi gyógyszerformát ismertet a 2.025.227 számú brit szabadalmi leírás. A találmány azon a megfigyelésen alapszik, hogy különböző stabilizált humán sejtvonalak esetében a dipiridamol azt a meglepő tulajdonságot mutatta, hogy fokozta a különböző humán interferonok proliferációt gátló hatását. Ezért a következőkben ismertetendő vizsgálatokat végeztük el: Négy stabilitált sejtvonalat használtunk. Ezek a következők voltak: MM-I CB, mely egy 70 éves férfi malignus melanoma-szövetéből (IV-es szint, PT4N0M0; Jpn. J. Dermatol., 96:947, (1986) származott; KT, mely egy 52 éves nő metasztatikus agydaganatából származott (J. Dai. Rés., 26:59, 1985; The 44th Meethin of Japanese Cancer Association, 718,1985); a PLC/PRF/5, mely humán hepatomából származott (1. Brit. J. Cancer, 34: 509- 515,1976), valamint egy RSa típusú transzformált sejtvonal (Virology, 135: 20-29, 1984 és J. Natl. Cancer Inst., 56:919-926,1976). A sejtek tenyésztését Eagle-féle minimális tápfolyadékban (EMEM) végeztük, mely 10%-fötális bovin-szérumot (GIBCO, U.S.A.) és antibiotikumokat (100 jxg sztreptomicin/ml és 100 egység penicillin G/ml) tartalmazott. A tenyésztést inkubátorban végeztük, 37 °C hőmérsékleten, 5%-os széndioxidtartalom mellett. A természetes HuIFN készítményeket: a/108 nemzetközi referencia egység (NE) (mg fehérje), ß/107 NE/|ry <t>eti'p<p£) 'a RX-ß, valamint yi0° NE/mg fehérje), az ENZO BIOCHEM INC. (U.S.A.), a Flow-Rentschler Inc. (NSZK), valamint a Paesel GmbH Co. (NSZK cégtől szereztük be. A dipiridamolt és a mopidamolt a Boehringer Ingelheim GmbH (NSZK) biztosította számunkra. Egyéb kémiai szerepeket a Nakarai Co., Ltd. (Japán) cégtől szereztük be. A találmányt részletesebben az ábrák és példák segítségével ismertetjük. Ábráink közül:- az 7. ábrán az MM-ICB proliferációs görbéi láthatók. Jelzések: 0-10 egység/ml HuIFN-ß-nak megfelelő äl-HuIFN-ß-val végzett kezelés; o - 0,1 p.m dipiridamollal végzett kezelés; A -10 egység/ml HuIFN-ß-val végzett kezelés; 1 -10 egység/ml Hu- I FN-ß-val és 0,1 jiM dipiridamollal végzett kezelés; n - a hatóanyagokkal végzett kezelés időtartama;- 2. ábrán a morfológia és sejtmegosztás látható 6 nappal a HuIFN-ß-val és dipiridamollal végzett folyamatos kezelést követően, MM-ICB sejtvonal esetében éspedig a 2A képen 10 egység/ml HuIFN- ß-nak megfelelő äl-HuIFNß; a 2B képen 0,1 jj.M dipiridamol; aa 2C képen 10 egység/ml HuIFN-ß; és a 2D képen 10 egység/ml HuIFN-ß és 0,1 p.M dipiridamol;-a 3. ábra A jelű diagramján sejt-túlélési százalékok láthatók, 6 nappal a 0,1 |jlM dipiridamollal és a HuIFNa (A és s), - ß (0 és 1), valamint - 7 (o és n) különböző mennyiségeivel (egységek) végzett folyamatos kezelést követően, MM-ICB sejtvonal esetében. A jelzések jelentése: A, o és 0 - önmagában adott HuIFN-nel végzett kezelés; 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
