200930. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfino-szénhidrogének arany-, ezüst- és rézkomplexeit tartalmazó, daganatos sejtek szaporodását gátló gyógyászati készítmények előállítására
HU 200930 B A találmány tárgya eljárás az ismert (I) általános képletű komplex foszfino-szénhidrogén-származékokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A találmány szerint előállított készítmények hatóanyagai az ismert trisz{bisz(difenil-foszfino)etánj-diréz (I) származékok, amelyek a tumorsejtek szaporodását gátolják. Ezek a hatóanyagok emlősök sejtjeire in vitro citotoxikus hatást gyakorolnak, például citotoxikus hatásúak B16 melanoma sejtekre és tumorgátló hatásúak in vivo állati tumor sejtekre, például P 388 leukémia-sejtekre és M5706 retikulumsejt szarkómára egérben. Marsich és munkatársai /J. Inorg. Nucl. Chem., 34(3), 933-946 (1972)/ a diklór-[trisz{l,2-bisz(difenil-foszfino)-etán}-diréz(I)]-bisz(kloroformot), ennek bróm- és jódanalógjait, Albano /J. Chem. Soc., Dalton Trans, 1938-1943 (1972)/ a diklór[tnsz{l,2-bisz(difenil-foszfino)-etán}-diréz(I)]-bi sz(acetont), Edwards és munkatársai /J. Chem.,Soc. Dalton Trans, 637-643 (1975)/ a bísz(acetáto)-[trisz{l,2-bisz(difenil-foszfino)-etá n}-diréz(I)]-t, Carty és munkatársai/Can. J. Chem., 49(5) 761-766 (1971)/ a bisz(nitráto)-[trisz{l,2- bisz(difenil-foszfino)-etán}-diréz(l)]-t ismertetik az előzőekben említett szakirodalmi helyek egyikén sem ismertetnek, nem javasolják gyógyászati készítmények előállítását vagy ilyen készítmények alkalmazását sem. A találmány szerint az (I) általános képletű vegyüietek tumorsejtek szaporodását gátló mennyiségét gyógyászati célra alkalmas hordozó és/vagy egyéb segédanyagokkal keverjük össze. A hatóanyagok (I) általános képletében Ph jelentése fenilcsoport és az X helyettesítők azonosak, jelentésük halogénvagy nitrát-ion. A találmány szerinti készítmények alkalmasak az (I) általános képletű vegyületekre érzékeny tumorsejtek által megbetegített állatok kezelésére. Az ismert (I) általános képletű vegyületek szakember számára hozzáférhető eljárásokkal előállíthatók. Az (I) általános képletű, X helyettesítőként klorid-iont tartalmazó vegyületet réz(I)-klorid és 1,2- bisz(difenil-foszfino)-etán kloroformban végzett reagáltatásával állítjuk elő. Az utóbbi vegyület kereskedelmi forgalomban kapható, a Strem Chemicals, Inc., Danvers, Massachusetts terméke. Azoknak az (I) általános képletű vegyületeknek az előállítására, amelyekben X jelentése nitrátion, Carty és munkatársai eljárását (Can. J. Chem., 49, 761-766 (1971)/ alkalmazhatjuk, azaz feleslegben lévő (IV) általános képletű vegyületet réz(II)-nitráttal reagáltatunk. Amint azt az előzőekben már ismertettük, az (I) általános képletű vegyületek tumorsejt-szaporodást gátló hatásúak. A vegyületek aktivitását különféle vizsgálómódszerek alkalmazásával igazoltuk. A tumorgátló szerek kiválasztására és az aktív vegyületek alaposabb vizsgálatára napjainkban legáltalánosabban alkalmazott állati-tumor-modell a P388 limfocita leukémia modell. Ez a tumorrends?er széleskörűen elfogadott a tumorgátló anyagok vizsgálatára, mivel lényegében minden klinikailag 1 aktív daganatgátló szerre érzékeny, mennyiségi és reprodukálható eredményt ad, kiterjedt vizsgálatra is használható és előre jelzi a más állati tumor-modelleken várható aktivitást. Azok a szerek, amelyek azintraperitoneális (ip.) P388 tumormodellben aktívak, általában más tumormodellekben is aktívak. Az (I) általános képletű vegyületek tumorgátló hatását P388 leukémia-sejteken vizsgáljuk a következő módon. 106 P388 leukémiasejtet ip. B6D2Fi egérben tenyésztünk. 24 óra múlva - amennyiben a tumortenyészet tiogliklát levesen 24 órán át tenyésztve baktériummentesnek bizonyul - az állatokat véletlenszerűenó fős csoportokra osztjuk és cipősdobozokban helyezzük el. A fémkomplexeket - oldhatóságuktól függően - minimális mennyiségű N,N-dimetil-acetamidban (DMA) vagy 95%-os etanolban oldjuk fel. Az oldathoz azonos térfogatú sóoldatot adunk, ha a komplex kiválik az oldatból, azonos térfogatú Cremophort (polietoxilált ricinusolaj) adunk hozzá, majd annyi sóoldatot, hogy a kívánt dózist 0,5 ml végtérfogatban kapjuk. A DMA, az etanol és a Cremophor koncentrációja a kész oldatban 10%. A kisebb dózisokat ebből az oldatból sóoldatos hígítással készítjük, így a dóás csökkenésével csökken a hordozóanyag szerves oldószer tartalma. Az alkalmazott hordozóanyagokkal oldat vagy szuszpenzió formájú készítményeket állítunk elő. A készítményeket közvetlenül a beinjektálás előtt készítjük el. Az (I) általános képletű hatóanyagot ip. adjuk be az 1-5. napon, azaz a kezelést a tumorsejtek bevitelét követően 24 órával kezdjük meg. Minden vizsgálatban 3, egyenként 6 állatból álló kontrollcsoportot alkalmazunk, egy kezeletlen kontrollcsoportot és két pozitív kontrollcsoportot, amelyeknek cisplatint adunk két különböző dózisban. Az állatokat az 1., 5. és 9. napon csoportonként megmérjük, az észlelt átlagos tömegváltozást a toxicitást következményének tekintjük. Minden vizsgálatban szerepel még egy 8 egérből álló, 105 -10° P388 leukémiasejttel ip. fertőzött „fertőzés titrálási (inoculum titration) csoport is. A titrálás alkalmas arra, hogy a vizsgált vegyülettel elpusztított sejtek számát kiszámítsuk. Az állatok pusztulását naponkénti megfigyeléssel követjük nyomon, a vizsgálatot 45 nap elteltével fejezzük be. Meghatározzuk az átlagos túlélési időt és az élettartam növekedést, amely az átlagos túlélési idő százalékos növekedését jelenti a kezeletlen kontrolihoz képest. A 106 P388 leukémiasejttel befertőzött kezeletlen kontroll átlagos túlélési ideje általában 10-11 nap. A vizsgált vegyületet akkor tekintjük hatásosnak, ha az általa előidézett élettartam növekedés ő 25%. Az X jelentésében kloridiont tartalmazó (II) általános képletű vegyület hatását két kísérletben vizsgáltuk P388 leukémia modellben. 2 mg/kg MTD* mellett 100% ill. 115% élettartam növekedést észleltünk (* = ip. qDx5 adagolás mellett B6D2F nőstény egerek számára maximális tűrhető dózis). Az eredmények azt igazolják, hogy az (I) általános képletű vegyületek jelentős citotoxikus és tumorgátló hatást fejtenek ki. Egy másik kemoszenzitív tumormodell az egérbe intraperitoneálisan beültetett M5076 retikulum-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
