200771. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
13 Hü 200771 B 14 tisztított anyagot ezután Sephadex oszlopon vetjük alá kromatográfiának előnyösen acetonitril eluálószer alkalmazásával és az így kapott vegyületeket hplc kromatográfiásan izoláljuk. Ha lényegében tiszta formában kapjuk a vegyületet, akkor tovább tisztíthatjuk kristályosítással, például metanolból, izopropanolból, vagy metanol-víz elegyből kristályosíthatunk és a találmány kiterjed a vegyültek kristályos formában történő előállítására is. A fenti módszerek megfelelő kombinációjával a (II) általános képletű vegyületeket szilárd formában izoláljuk. Attól függően, hogy a fent felsorolt tisztítási lépések közül melyiket alkalmazzuk, különböző tisztaságú terméket kapunk. A vegyületeket azonban a felhasználás céljának megfelelő tisztaságban használjuk. Humán gyógyászati felhasználásra legalább 90, előnyösen 95%-nál nagyobb tisztasági fok kívánatos. Állatgyógyászati vagy más felhasználásra alacsonyabb tisztasági fok is elégséges, például 50% vagy ennél alacsonyabb. Az OR5 helyén hidroxilcsoportot és az OR4 helyén hidroxil- vagy metoxicsoportot tartalmazó (III) általános képletű S541 antibiotikum intermediert előállíthatjuk az 85/7049. számú dél-afrikai szabadalmi leírásban leirt fermentációs és izolálási módszerekkel is. Ezekből a vegyületekből más (III) általános képletű intermediereket is előállíthatunk a (II) általános képletű vegyületek előállítására leirt fenti módszerekkel. A találmány további részleteit a következő példákkal illusztráljuk. Az (V) általános képletű vegyületeket faktoroknak nevezzük. (V) általános képletű vegyületek Faktor R R1 A-H-CH(CH3)2 B-CH3-CH3 C-H-CH3 D-H-CH2CH3 E-ch3-CH2CH3 F-CH3-CH(CH3)z Az A, B, C, D, E és F faktort a 85/7049. számú dél-afrikai szabadalmi leírásban megadott módszer szerint állítjuk elő. Nematospiroides dubius elleni hatást mértünk fertőzött egereken. CR/H 18-22 g tömegű nőstény egereket 100 L3 N. dubius lárvákkal fertőztünk meg, és 3 hétig hagytuk a fertőzést kifejlődni. Az egereket orálisan egy ízben kezeltük a 3/4 titált dózis szintek egyikén. Az adagolás propilén-glikolban történt. A fertőzés kifejlődése előtt legalább 3 napig, rendszerint 5 napig hagytuk az állatokat, majd leöltük az állatokat és eltávolítjuk vékonybelüket. A bél kivágott részét tompa végű ollóval felvágjuk és a bélnyálkahártyát kivesszük. A kifejlett férgeket módosított Baermann készüléken összegyűjtjük. A migrációs idő 5 óra, ezalatt a migráló férgeket 37 °C-on tartjuk. 5 óra múlva X2 nagyítóüveggel megvizsgáltuk a nylon gézt, amelyen keresztül mentek a férgek. Megszámláltuk a gézen fennakadt és az áthaladt férgeket és egyenként meghatároztuk az összes féreg-terhelést és összevetettük a kontrollal. 10 mg/kg hatóanyag lényegesen csökkentette a féreg-terhelést a kezelt egerekben, például a 8, 11, 14, 48 és 61. példa szerinti vegyületek több, mint 80%-kal csökkentették a kontrolihoz képest az átlagos féregterhelést. Az A faktor 23-szubsztituensének módosításával az inszekticid hatásra gyakorolt hatás értékelése Teszt-oldatokat állítunk elő oly módon, hogy a hatóanyagot 35% acetont tartalmazó vizes oldatban oldjuk fel. A kapott 1000 ppm koncentrációjú hatóanyag oldatot vízzel hígítjuk. Tetranychus urticae (P. rezisztens törzs) 2 foltos takácsatka 7-8 cm-es primér levelekkel rendelkező sieva lima bab növényeket választunk ki és cserepenként egy növényre visszavágjuk. A fő telepről vett levélről levágunk egy kis darabot és a tesztnövények minden levelére helyezzük. Ezt a kezelés előtt 2 órával végezzük, hogy lehetővé tegyük, hogy az atkák átmenjenek a tesztnövényre és tojásokat rakjanak. A levágott darab méregét úgy változtatjuk, hogy levelenként 100 atka legyen. A kezelés ideje alatt az atkák átvitelére használt levéldarabot eltávolítjuk és eldobjuk. Az atkákkal fertőzött növényeket 3 másodpercre megmártjuk a tesztoldatban keverés közben és szárításra füstelszívóba helyezzük. A növényeket két napig tartjuk, mielőtt az első levél segítségével a pusztítási fokot megállapítjuk. A második levelet még 5 napig a növényen tartjuk, mielőtt a tojások és/vagy az újonnan kikelt lárvák pusztulását megfigyeljük. Empoasca abrupta, burgonya kabóca kifejlett stádiumban Mintegy 5 cm hosszú Sieva lima bab levelet 3 percre keverés közben a tesztoldatba mártunk és szárításra füstelszívóba helyezzük. A levelet az alján egy nedves szűrőpapírt tartalmazó 100x10 mm-es Petri-csészébe helyezzük. Minden edénybe 10 kifejlett kabócát helyezünk és a kezelést 3 nappal a mortalitás számlálás előtt végezzük. Heliothis virescent, harmadik fázisú gyapottok bagoly 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
