200696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kombinált vakcina előállítására

HU 200696 B

(Gall, D., Immunology 1L 369, /1966/)], Pkironic nernionos felületaktív szerek [BASF gyártmány, poli(oxi-etiléo) és poli(oxi-propilén) kopolimerjei egy 0I^CH2CH20)y(CH-CIfc0)í(CIfeCH20)yH CH3 5

általános képletű, 1000-16000 molekulatömegű — x= 15-80, y= 0,5-230 — vegyüleüel (Schmolka,

LR.; J. Am. Oü Chem. M, 110/1977/)]; Avridin (Pfizer gyártmány,N,N-dioktadecil-N,N-bisz(2-hidroxietil)-propán-diamin /Niblack, J. F.; J. Retkuloendot- 10

heL Soc. 26,655, /1979/); olaj a vízben típusú emulziók, kívámesetbenE vitaminnal, Pluronic nemionos felületaktív szerekkel, avridinnel, dextrán-szulfáttal vagy hasonló anyagokkal együtt; víz az olajban típusú emulziók kívánt esetben Maicollal (Marcol 52 az 15

Exxon cég gyártmánya, erében finomított igen tiszta ásványolajok sora, amelyek az Amerikai Egyesült Államok gyógyszerkönyvének megfelelő minőségűek, az 52 szám a termék fajlagos sűrűségét és viszkozitását jelöli), Polysorbat 80-nal (polioxi-etilén)- 20 szorbitán-mooo-9-oktadekanoát nemionos emulgeáló- és diszpergálószer, M= 428), poli(szorbitán-monooleát)-tal, szaponinnal; migliollal (Miglyol 812, a Dynamit Nobel cég terméke, ürakcionált kókuszdióolaj, Ma 511, 8-10 szénatomos zsírsavak elegye), 25 izopropil-mirisztáttal, izopropil-palmitáttal és hasonló anyagokkal együtt, vagy kapszulák formájában például zselatin vagy hidroxi-propil-metil-cellulóz kapszulák szaponinnal vagy anélkül;- pufferek, így foszfát puffer, hidrogén-karbonát 30 puffer vagy trisz puffer, amelyek előnyösen 5-100 mól/l-esek;

3- tartósítószerek, így tiomerzál, m- vagy o-krezoi (előnyösen 0,2-0,5% mennyiségben) vagy benzil alkohol (előnyösei 1-2% mennyiségben).

A következőkben a találmányt példákban mutatjuk be.

1. Példa

Annak érdekében, hogy meghatározzuk a kezeletlen E. coli antigén álveszettség vírusra gyakorolt negatív hatás&, megmértük az álveszettség vírus fertőzőképességét azonos térfogatú E. coli antigén jelenlétében.

Az E. coli antigént a következő módon állítjuk elő: E. colit tenyésztünk szokásos körülmények mellett kazein hidrolizátumot és szorbitot tartalmazó tápközegben, a fermenttxban az oxigénadagolást, a keverési intenzitást és a pH-t folyqamatosan állítva.

40 óra tenyésztés irtán a tenyésztést megszűntetjük, a fermentlevet 15 percen át60-65 *C hőmérsékleten tartjuk, majd lehűtjük és centrifugáljuk. A felülúszőban lévő antigént ultraszűréssel betöményítjük. A kapott antigén koncentrátumot 0,5% formalin jelenlétében 16 órán ét 37 'C-on tartjuk.

A frissen készített E. coli antigént az álveszettség vírussal 1 órán át 37 *C-on inkubáljuk, majd a vírust egyrétegű Verő sejteket tartalmazó mikrottter lemezen 10-szeres hígításban titráljuk. A vírus ütert a talált citopatogén hatásból (CPE-kből) szállítjuk.

Eredményeinket az 1. táblázatban ismertetjük. Az eredményekből látható, hogy az E. coli anyag jelentős hatást fejt ki az ál veszettség vírus fertőzőképességére.

4

1. Táblázat

A vizsgálat sorszáma

Álveszettség vírus (ml)

E.coli

ml

antigén

típus

a<Xii)

ATiter a kontrolihoz hasonlítva .

1.

0,5

__

.

5,27

__

2.

0,5

0,5

K88ab

3,05

2,22

3.

0,5

0,5

K88ac

2,53

2,74

4.

0,5

0,5

K99

4,79

0,48

2. Példa

Az E. coli és álveszettség vírus kombináció hatása az álveszettség elleni védelemben az E. coli antigén (előkezelésével vagy anélkül A példa azt igazolja, hogy a találmány szerinti kezelések nélkül az álveszettség antigén és E. coli antigén kombinációja nem eredményez hatásos vakcinakombinációt. Az álveszettség antigén hatásosságát

egeret védő hatásával mérjük.

C 57 bllO törzsbe tartozó egereket vakcinálunk csökkenő mennyiségű, 100,25, illetve 6,25 pl vakcinával, majd 4 hét múlva virulens álveszettség vírus törzzsel, a Phylaxia törzzsel fertőzzük meg őket. Ennek eredményéből meghatározzuk az 50%-os védettséget nyújtó dózist (PDso). A vizsgálatok eredményét a 2. táblázatban ismertetjük.

3