200696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kombinált vakcina előállítására
HU 200696 B 5 6 2. Táblázat Gyártási szám Álveszettség antigén _____ILcoli LTK88 Kezelés PDso (pl-ben) Megjegyzés 3592 40% 5% nincs 150 elvetve (>50) 3633 40% — nincs 25,0 jó 4508 41% 4% nincs 119,0 elvetve (£50) 4509 41% — 10% marhaszérum 10,7 jó(<30) 4510 41% 4% 10% marhaszérum 28,0 jó(£50) 5087 25% — nincs 12,9 jó£50) 5089 25% 12% 4% marhaszérum 40,7 jó£50) 5091 25% 12% 200 egység trasylol 19,1 jó(S50) Az eredményekből nyilvánvalóan látható, hogy az E. coli antigén kezelése nélkül a vakcina nem elégíti ki az álveszettség elleni vakcinával szemben támasztott követelményeket (PDso £ 50 fii). A találmány szerinti kezelés alkalmazását követően a kombinált vakcina kielégíti a fenti követelményt 3. Példa Enziminhibitorok alkalmazása E. coli — álveszettség kombinált vakcinában Az endogén proteáz-aktivitásokat különféle enziminhibitorok alkalmazásával számoljuk fel Az alkal- 20 mázott inhibitorok példaként szolgálnak, nem zárják ki más inhibitorok alkalmazását Az antigénnek az inhibitorok alkalmazását követően meglévő aktivitását standard ELISA teszttel mérjük. Eredményeinket a 3. táblázatban mutatjuk 25 be. 3. Táblázat Sorszám Álveszettség antigén E.coli antigén Kezelés ELISA eredmény % a kontrolihoz hasonlítva (N) 1. + _ _ 101,0% (5) 2.+ — 0% (3) 3. + +-53,0% (3) 4. + + PMSF 5 mmól/1 92,9% (5) 5. + + NMI 5 mmól/1 102,9% (4) 6. + + MIA 5 mmól/ml 93,9% (3) . 7. + + TRAS 500 E/ml 94,5% (3) 8. + + TI 3,7 mg/ínl 97,5% (4) 9. + + EDTA 4,5 mmól/1 953% (3) 10. + + öregítés 1023% (10) PMSF: fenil-metánszulfonil-fluorid a teszttel mérve). NMI: N-etil-mateimid 45 MIA: monojód-acetamid 4. Példa H: tripszin-inhibitor (szójabab) TRAS: Trasyld = Aprotininrproteáz-inhibitor E. coli antigén találmány szerinti kezelése „öregítéssel EDTA: edlén-diamin-tetraecetsav A fenti enziminhibitorokkal az antigén anyagot éjszakán át 4 *C hőmérsékleten, pH 7,0 ±0,5 értéken kezeljük. Atz öregítést4 héten át 4 *C hőmérsékleten tartással végezzük. A 2. és 3. példában tent kezeléseket külön E. coli antigén anyagon végezzük. A fenti kezelésekkel az antigén anyag lényegében enzimmentessé vált Kezelés nélkül az álveszettség antigén mérhető mennyisége 53%-ra csökken. A különböző — a 3. táblázatban feltüntetett — kezeléseket követően az antigénmennyiség legalább 93%-a megmarad (ezzel 6-8 hetes Swiss albino egereknek intramuszkulá- 50 risan különböző dózisa, 4,16, illetve 64 pl a 3. példában megadott módon öregített vakcinát adunk be. Ezt követően 4 héttel az állatokat a 2. példában ismertetett módon megfertőzzük. A vakcina álal kifejtett védőhatást azzal a dózissal fejezzük ki, amely 50%- 55 os védelmet nyújt (PDso). Az elfogadható vakcinával szemben támasztott követelmény az, hogy a PDso 5 50 pl értéknek feleljen meg. Az E. coli komponens kiváltotta antitesteket a fenti egerek szérumában az antitest titer megállapítására 60 szolgáló standard ELISA teszttel mérjük. Minden érték hat szérumból mért eredmény átlaga. Eredményeinket a 4. táblázatban mutatjuk be. 65 4
