200696. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kombinált vakcina előállítására
HU 200696 B A találmány tárgya eljárás állatállomány immunizálására szolgáló kombinált vakcina előállítására. A nagyüzemi állattenyésztő telepeken különösen fontos a vakcinálás ahhoz, hogy az állatállományt egészségesen tartsák. Fokozottan érvényes ez az intenzív állattenyésztés körülményei között, amely nagy állománysűrűséggel jár, ahol a vírus-, bakteriális- vagy parazita-fertőzés rövid idén belül az egész állományra kiterjedhet, és ez gyakran katasztrofális következményekkel jár. Ezért, a fertőzés megelőzésére az állatállományt vakcinálják, például külön-külön többek között Escherichia coli (E. coli) fertőzéssel és herpesz vírus fertőzéssel, így az „Aujeszky kór-ként is megnevezett álveszettséggel (pseudorabies) szemben. Az említett vakcinálást általában immunogén anyagnak ékS (legyöngített vagy nem legyöngített) vagy elölt patogén fámájában való beadásával végzik. Gazdasági szempontból nyilvánvalóan vonzó, ha az immunogén anyagot a különböző patogénekből kombinált egyetlen vakcinaként készítik el és ezt az egy vakcinát adják be. Nem találták azonban lehetségesnek olyan kombinált vakcina készítését, amely stabil immunizáló aktivitással bír mind az E. coli, mind a herpesz vírus okozta kórokkal szemben, és amely vakcina Mss E. coli anyag és herpesz vírus anyag egyszerű egymáshoz adásával előállítható. Nem várt módon azonban azt találtuk, hogy az ilyen kombinált vakcina valójában előállítható. A találmány tárgya ennek megfelelően olyan kombinált vakcina előállítása, amellyel egyidejűleg lehet végrehajtani az E. colival és a herpesz vírussal szembeni immunizálás végrehajtást Közelebbről, a találmány szerint előállított vakcina immunogén E. coli anyagot és herpesz vírus anyagot tartalmaz, amelyek közül legalább az E. coli nem kívánt enzimaktivitása gátolt vagy döntően hiányzik. Nem várt módon azt találtuk, hogy a kombinált vakcinában jelen lévő vírus anyag immunogén aktivitása jelentősen megnövekszik akkor, ha az enzimaktivitást a két vakcinakomponens kombinálása előtt, alatt és/vagy után eltávolítjuk. Ez valószínűleg különösen az E. coli anyagában jelen lévő enzimek aktivitásával van összefüggésben. Anélkül, hogy biztonsággal megbízható magyarázatot tudnánk adni, azt feltételezzük, hogy a kombinált vakcina immunogén hatását főként az E. coli anyagából adódó proteolitikus enzimaktivitás érinti károsan. Az E. coli anyaga, és kívánt esetben a vírus anyaga is enzimaktivitástól mentessé vagy lényegében mentessé tehető a kombinált vakcina készítését megelőzően. Ezt aktív vagy passzív ütem érhetjük el. Az enzimaktivitás passzív eltávolítása úgy történik, hogy a kombinált vakcina készítésére szánt E. coli anyagot önmagában megfelelően hosszú ideig tároljuk. Megfelelő például a 2-4 hét körüli tárolási idő 4 *C körüli hőmérsékletem Az előzőekben említett lehetséges magyarázattal összhangban arra következtethetünk, hogy a tárolás alatt egy öregedési folyamat zajlik le, amelynek során a proteolitikus enzimek inaktiválódnak. Lehetőség van arra is, hogy az anyagot aktívan mentesítsük az enzimaktivitástól, például először az elkülönített anyagokat lényegében mentesít1 jük az enzimaktivitástól például kicsapással, (oszlop)kromatográfiás eljárással, centrifugálással, elektroforézissel vagy más biokémiai vagy mikrobiológiai elválasztási és tisztítási eljárásokkal vagy enziminhibitor adagolásával az anyagot kellő ideig tárolva, nagy koncentrációjú idegen fehérje adagolásával például szénán vagy szérum fehérjék formájában vagy az enzimek denaíurálásával. Másképpen, vagy az előzőek mellett úgy is eljárhatunk, hogy az enzimaktivitást a kombinált vakcina készítése során vagy közvetlenül azt követően szűntetjük meg vagy csökkentjük jelentősen, például oly módon, hogy enziminhibitort vagy nagy koncentrációjú idegen fehérjét adunk a készítményhez vagy biokémiai vagy mikrobiológiai elválasztási módszerekkel vonjuk el az immunogén anyagokból az enzimaktivitást. A találmány tárgyát különösen az olyan kombinált vakcinák előállítása képezi, amelyekben herpesz vírusként álveszettség vírus vagy marha herpesz vírus van. Megfelelő enziminhibitorok például az N-etil-maleimid, a monojód-acetát, a monojód-acetamid, a Trasylol, az EDTA, a fenil-metánszulfonil-fluorid (PMSF) és a tripszininhibilorok, például az ún. „szójababn tripszininhibitor. A vakcinához vagy a vakcinakomponensekhez adható megfelelő fehérjék például a szérumfehérjék, amelyeket az előzőekben már említettünk, teljes szérum vagy annak egyes komponensei formájában — például a szérum albuminok—, a tejfehérjék vagy a tojásfehérjéi A találmány szerint előállított vakcinákban E. coli vagy E. coli variánsok (spontán vagy indukált mutánsok vagy rekombináns DNS eljárással módosított E. coli) elkülönített antigén frakcióját alkalmazzuk. Sertés vakcina esetén például az alkalmazott antigén frakció az ún. K88-csilló antigént tartalmazza. Természetesen ilyen eltérő mikroorganizmusokkal előállított E. coli antigének is használhatók, amely mikroorganizmusok genetikai anyaga rekombináns eljárással olyképpen módosított, hogy kívánt esetben a mikroorganizmus megnövelt hozammal képes E. coli antigént termelni. A találmány szerint előállított vakcina herpesz vírus anyaga elölt vagy élő, kívánt esetben legyöngített vírust tartalmaz, amelynek patogenitását és/vagy virulenciáját lecsökkenjük vagy megszűntetjük, adott esetben spontán vagy indukált mutációval vagy rekombináns DNS eljárással Adott esertben az is lehetséges, hogy a kombinált vakcinában izolált immunogén vírus-anyagot alkalmazzunk. Lehetséges például a találmány szerint olyan kombinált vakcina előállítása, amelyet sertésnek beadva egyidejűleg immunizálja a sertés utódait sertés hasmenés és álveszettség-vírus vertőzés ellen. A találmány szerint előállított vakcina az immunogén anyagon kívül a következő komponenseket tartalmazhatja:- stabilizálószerek;- segédanyagok, így alumíniumsók például Al(OH)3, AIPO4, Ab(S04)3; crfD(P04)2; szaponin; DDA [dimetil-dioktadecil-ammónium-bromid MW630, Kodak gyártmány; vakcinákban általában nedvesítőszerként és segédanyagként alkalmazzák 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
