200686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás reumás eredetű ízületi gyulladások kezelésére, vagy megelőzésére alkalmas, EPA-t és/vagy DHA-t tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 200686 B mennyiségben alkalmazzuk. A karbamid-oldatot a zsírsav eleggyel homogén elegy nyeréséig elkeverjük. Ezután a karbamidot kicsapjuk, előnyösen a karbamiddal kezelt oldat hűtésével Ennek során a telített és mono-telítetlen zsírsavak a karbamid kristályokkal komplexet alkotnak és kiválnak. A hűtést például úgy végezhetjük, hogy az oldatot kívánt esetben hosszabb ideig állni hagyjuk Ugyanakkor, az oldat mechanikus úton is hűthető, például vízfürdő alkalmazásával. Jó eredményeket érhetünk el, ha az oldatot legalább S0 *C, előnyösen 30-40 *C hőmérsékletre hűtjük. A karbamid még teljesebb eltávolítására az oldat hűtőszekrényben egészen -10 *C hőmérsékletig is hűthető. A telített és mono-telítetlen zsírsavak és karbamid által alkotott komplexet ezután kiszűrjük vagy bármely más módszenei elválasztjuk A szűrletet ezután bepároljuk, például bepárló készülék alkalmazásával, és igy az oldószer jelentős részét eltávolítjuk, majd a még visszamaradt karbamidot a zsírsav elegyből 5%os sósav alkalmazásával kimossuk Az oldószer vízzel történő extrakcióval is eltávolítható, melynek során 1 tömegrész vizet alkalmazunk A kapott zsírsav elegy a magasabb fokon telítetlen zsírsavak lényegében tiszta keveréke. Úgy találtuk, hogy ezek az egyes zsírsavak teljesen elválaszthatók igen egyszerű és könnyen végrehajtható módszerrel, melynek során először a zsírsavakat szerves oldószerben, például acetonban oldjuk, majd fokozatosan lehűtjük az oldatot, amíg a kívánt zsírsav az oldatból kiválik Az oldatnak fokozatos hűtése közben a különböző zsírsavak az oldószerben mutatott különböző oldhatóságuk következtében kicsapódnak Amint ezek a zsírsavak egyenként kicsapódnak azokat eltávolítjuk az oldatból. Az oldatban levő koncentrációjuktól függően a különböző zsírsavak különböző ponton csapódnak Id az oldatból. Például úgy találtuk bogy a DHA10%-os acetonos oldatból -38 és 40 ‘C között válik ki Ugyanakkor az EPA-60 *C hőmérsékleten válik ki. A többi zsírsav legtöbbje -30 *C feletti hőmérsékleten válik ki. Az oldatot fürdőn szárazjég-aceton elegyen hűtjük. A -38 —40 *C hőmérsékleten kiváló csapadékot üvegszűrőn vagy Büchner-tölcséren végzett szűréssel távolítjuk el anélkül hogy a hőmérsékletet növélnénk A kapott kristályok analízise azt mutatja, hogy ez az anyag lényegében tiszta DHA, és az NMR vizsgálatok nem mutatnak cisz-transz konverziót A -60 ’C hőmérsékleten kiváló anyag gyakorlatilag 100%-ban tiszta EPA-nak bizonyul, cisz-transz konverzió nélkül Az EPA és DHA elválasztása során szükséges igen alacsony hőmérsékletek elkerülésére a felülúszó térfogata minden egyes kristályosítási lépés után csökkenthető, ezáltal a zsírsavak oldhatósága csikken, és 7 a lényegében tiszta DHA és EPA elegye keletkezik. Az alacsony hőmérsékleten végzett frakcionált kristályosítás során az oldószer-csökkentéssel végzett eljárást a karbamiddal történő kezelési lépés ulén végezhetjük. Ennek során a karbamidos kezelési lépésben nyert, magasabb fokon telítetlen zsírsavak elegy ét ugyanolyan szerves oldószerben oldjuk, melyet a hőmérséklet csökkentésével végzett eljárás során alkalmaztunk, péládul 10%-os acetonos vagy petrolétercs oldatot készítünk. Egy éjszakán át -20 'C hőmérsékleten történd hűtés után a visszamaradt telített zsírsavak és különböző, alacsonyabb fokon telítetlen zsírsavak kiválnak az oldatból. A csapadékot ezután elválasztjuk és döntjük. Az oldat térfogatát ezután csökkentjük, és ezáltal koncentrációját növeljük. Ezt az old<Wer lepárlásával vagy lcdesztillálásával végezzük, melynek során az eredeti térfogat előre meghatározott részére csökkentjük a térfogatot, például az eredeti térfogat egyhatmadára. Ezután a csökkentett térfogatú oldatot ismét -20 ‘C hőmérsékletre hűtjük, melynek során új mono-teli teilen zsírsav kristályok jelennek meg, melyeket ismét kiszűrünk. Ezután a szűrlet térfogatát ismét 1/2-1/9-ére csökkentjük, és a maradékot egy éjszakán át -20 'C hőmérsékleten hűtjük. Ekkor az oldatból a di-telítetlen zsírsavak válnak ki. Ezeket a kristályokat ismét kiszűrjük és döntjük. Annak megállapítására, hogy valamennyi nem-kívánt zsírsav kikristályosodott az oldatból, a szűrlet tovább hűthető -30 *C hőmérsékletre. Amennyiben nem jelennek meg kristályosok, a tisztítás teljes. Ezután az oldószer lepárolható. A visszamaradt foyladék az EPA és DHA lényegében tiszta keveréke. Kívánt esetben ezek a komponensek is elválszthatők -38 —40 ‘C hőmérsékletre történő hűtéssel melynek során a DHA válik ki. Reumás eredetű ízületi gyulladásban szenvedő betegeket kezeltünk trigUcerid-formájű EPA-t és DHA- t tartalmazó szardiniaolajjal és olyan szardiniaolajjal, melyet savval hidrolizáltunk, és a glicerint eltávolítójuk. A kísérletet 25 napig végeztük. Minden beteg naponta három teáskanál olajat kapott, és táplálkozási szokásuk és a táplálék összetétele változatlan maradi A kontrollcsoportnak naponta három teáskanál földimogyoró-olajat adtunk. A vizsgálat során vizsgáltuk a kezelt személyek eritrocita kiülepedési értékéi Az eritrocita süllyedési értéket a Westergrenmódszerrel határoztuk meg, mivel ezt találtuk a betegség mértékének legobjektívabb és legpontosabb módszerének. Minél alacsonyabb a kiülepedés mértéke, annál enyhébb a betegség. A20-35 értékeket tekintettük normál állapotnak. A kísérlet eredményeit az alábbi táblázatban szemléltetjük: 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
