200488. lajstromszámú szabadalom • Eljárás de-mannozil-teikoplanin-származékok előállítására
1 HU 200488 B 2 ennek a találmánynak az oltalmi körébe tartozik. Az említett keverékeket használhatjuk úgy, ahogy vannak, vagy igény szerint az öt külön komponensre szétválaszthatjuk ismert technikák alkalmazásával, például fordított fázisú megoszlással, ioncserélő kromatográfiával vagy preparatív HPLC-vel (lásd hivatkozásként a 4 542 018 sorszámú USA szabadalmi bejelentést). A jelen találmány szerinti teikoplanin származékok antibiotikusan aktív vegyületek. A . rövidség kedvéért mindegyik, jelen találmány szerinti, de-mannozil-teikoplanin vegyületet a továbbiakban a konvencionális nevén fogjuk említeni, amely utal arra a teikoplanin komplex fő-komponensre amelyből származik, eléje rakva a DM rövidítést. Ennek megfelelően DM-TA2-1 jelöli az 1. komponens (TA2-1) de-mannozil származékát; DM-TA2-2 jelöli a 2. komponens (TA2-2) de-mannozil származékát; DM-TA2-3 jelöli a 3. komponens (TA2-3) de-mannozil származékát; DM-TA2-4 jelöli a 4. komponens (TA2-4) de-mannozil származékát; DM-TA2-5 jelöli az 5. komponens (TA2-5) de-mannozil származékát. A találmány szerinti vegyületek antibakteriális ak- 5 tivitását in vitro igazolhatjuk a standard hígítási tesztekkel különböző mikroorganizmus tenyészetekben. A táptalajok és növesztési körülmények a MIC (minimális gáltó koncentráció) meghatározásához a következő voltak: Isosensitest táptalaj (Oxoid), 24 10 óra a staphylococcusokhoz, Strep, felcalis-hoz és Gram-negatív baktériumokhoz (Escherichia coli): Todd-Hewitt táptalaj (Difco), 24 óra más streptococcus fajokhoz; GC base táptalaj (Difco) + 1 % Isovitalex (BBL), 48 óra, CO2 gazdag atmoszféra Neisseria 15 gonorrhoae-hor, Brain Heart táptalaj (Difco) + 1 % Supplement C (Difco), 48 óra Haemophilus influemae-hoz; Az oltóanyag 104—105 telepképző egység/ml volt a táptalaj hígításos MIC-ekhez. A fenti de-mannozil teikoplanin származékok minimális gátló koncentrációját (MIC, mikrogram/ml) néhány mikroorganizmusra az 1. táblázatban mutatjuk be. 20 1. táblázat Törzs M. I. DM-TA2-2 C. (mikrogram/ml) DM-TA2-3 DM-TA2-4 DM-TA2-5 Staph, aureus LI65 0,063 0,063 0,125 0,063 Staph, aureus (106 telepképző egység/ml) 0,125 0,125 0,25 0,125 Staph, aureus (30 % borjú szérum) 0,5 0,5 0,5 0,5 Staph, epidermidis LI47 ATCC 12228 (Koaguláz negatív) 0,063 0,063 0,063 0,063 Strep, pyogenes L49 C203 0,063 0,063 0,063 0,063 Strep, pneumoniae L44 UC41 0,063 0,063 0,063 0,063 Strep, faecalis L149 ATCC 7080 0,063 0,063 0,063 0,063 Strep, mitis L796 (klinikai izolatum) 0,063 0,063 0,125 0,063 Neisseria gonorrhoeae L997 ISM68/126 32 32 32 32 Haemophilus influenzae L 970 type b ATCC 19418 64 64 64 32 Escherichia coli L47 SKF 12140 128 128 128 128 Proteus vulgaris L79 Y19H ATCC881 128 128 128 128 Pseudomonas aeruginosa LA ATCC10145 128 128 128 128 Staph, haemolyticus L602 (klinikai izolátum) 0,5 0,5 0,5 0,25 Amint az a szakirodalomból ismert, akár gyógyászatiig elfogadható savakkal (vagy bázisokkal) vagy gyógyászatiig nem elfogadható savakkal (vagy bázisokkal) való sóképzés alkalmazható mint egy kényelmes tisztítási technika. A jelen találmány szerinti de-mannozil-teikoplanin származékokat úgy állítjuk elő, hogy a teikoplanin 50 komplexből választott szubsztrátot, az egyes komponensek bármely keverékét, vagy ezek közül egyetlen komponenst, amelyet az (I) általános képlettel lehet jellemezni, és amelyben R jelentése: TA2-l:N-(2-Z-decenoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-2 N-(8-metil-nonanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-3: N-dekanoil-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopi- 60 ranozil csoport; TA2^4: N-(8-metil-dekanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-5: N-(9-metil-dekanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; Rí jelentése N-acetil-béta-D-2-dezoxi-2-amino- 45 -glükopiranozil-csoport; R2 jelentése alfa-D-mannopiranozil csoport, mikrobiológiai transzformációnak vetjük alá a Nocardia orientalis NRRL 2450, Streptomyces candidus NRRL 3218 törzsek közül választott mikroorganizmussal, vagy ezek olyan természetes variánsával, vagy mutánsával, amely megtartotta a képességét arra, hogy a teikoplanin molekulában lévő, D-mannózhoz kapcsolódó glikozidos kötést elhasítsák, vagy a tenyé- 55 szetekből származó mosott micéliummal vagy sejtmentes preparátummal. A jelen találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint a kiválasztott kiindulási anyagot akár tiszta formában, akár nyers preparátumként, beleértve az Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 törzs fermentlevét is, érintkezésbe hozzuk a fenti törzsek közül az egyiknek növekvő tenyészetével fermentációs körülmények között. 3
