200488. lajstromszámú szabadalom • Eljárás de-mannozil-teikoplanin-származékok előállítására
1 HU 200488 B 2 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű de-mannozil-teikoplanin antibiotikum származékok, ahol R jelentése N-(Z-4-decenoil)-béta-D-2-dezoxi-2- -amino-glükopiranozil, N-(8-metil-nonanoil)-béta- D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil, N-(8-metil-dekanoiI)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil, N-dekanoil- vagy N-(9-metil-dekanoil)-béta-D-2- dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; Rí jelentése N-acetil-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; R2 jelentése hidrogénatom; és ezek bármilyen arányú keverékének előállítására. A találmány tárgya eljárás az említett antibiotikum származékoknak a megfelelő teikoplanin prekurzorokból való előállítására. A teikoplanin az Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 törzs által emészthető szén és nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmazó tenyészközegben termelt antibiotikum. Az említett törzs által termelt főtermék három fő komponensnek (Ai, A2 és A3) a keveréke, melyet eredetileg teichomycinnek neveztek (4 239 751 számú USA szabadalmi leírás). Az újabban előállított teikoplanin preparátumok, melyeket a fermentléből kinyert termék tisztításával nyernek és alkalmasak Gram-pozitív mikroorganizmusok által okozott fertőzések kemoterápiás kezelésére [H. H Williams et. al.: Journal of Hospital Infection, 7 (Supplement A) 101-103 (1986)], fő komponensként öt, szerkezetileg szoros kapcsolatban álló anyag komplexét tartalmazzák, amelyeket eredetileg együttesen teichomycin A2 faktornak neveztek. Az említett öt, közeli rokonságban lévő vegyületet egymás után izolálták és a komplex egy-egy komponenseként jellemezték, amely komplexet azután mind a szakirodalomban, mind a szabadalmi irodalomban „teikoplanin A2” vagy „teikoplanin komplex” néven említenek. A teikoplanin komplex öt fő komponensét (konvencionális nevük: TA2-1, TA2-2, TA2-3, TA2-4 és TA2-5) az (I) általános képlettel írhatjuk le, amelyben R jelentése TA2-1 :N-(Z-decenoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-2:N-(8-metil-nonanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-3:N-dekanoil-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-4:N-(8-metil-dekanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; TA2-5:N-(9-metil-dekanoil)-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; Rl jelentése N-acetil-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport; R2 jelentése alfa-D-mannopiranozil csoport. A komponensek aránya a teikoplanin komplexben változik, függően a fermentációs körülményektől és a fermentléhez adagolt prekurzoroktól (lásd a 204179 számú E.P.A. publikációt). Korábban leírták a teikoplanin aglikonját (L 17392), azaz a fenti (I) általános képletű vegyületből azt, amelyben R=Ri=R2, jelentésük hidrogénatom, valamint két pszeudo aglikont, nevezetesen az L 17054 jelű vegyületet [(I) általános képlet, R jelentése a hidrogénatom, Rt jelentése N-acetil-béta-D-2-dezoxi-2-amino-glükopiranozil csoport, R2 jelentése alfa-D-mannopiranozil csoport], és az L 17046 jelű vegyületet [(I) általános képlet R=R2, jelentésük hidrogénatom, Rt jelentése N-acetil-béta-D-2-dezoxi-2- -amino-glükopiranozil csoport]. A teikoplanin említett származékait úgy állítjuk elő, hogy a teikoplanin komplexet vagy annak egyes fő komponenseit megfelelő körülmények között savasán hidrolizáljuk. Lásd például a 146053 sorszámú, a 119575 sorszámú és a 119574 sorszámú E.P.A. publikációkat. Összefoglalva, gyengén savas körülményekkel eltávolítható az acilglükózamin egység, erősebben savas körülményekkel eltávolítható a mannóz egység is, és még erősebb savas kezeléssel eltávolítható a megmaradt N-acetil-glükózamin egység, így állítható elő az ágiikon. De-mannozil teikoplanin származékokat, azaz olyan teikoplanin származékokat, amelyekben R és Rl jelentés ugyanaz mint az előzőkben bemutatott teikoplanin komplexben, és R2 jelentése hidrogénatom, még addig nem írtak le, és valószínűleg nem állíthatók elő savas kezeléssel. A teikoplanin lúgos kezelése az N-terminális végtől számított harmadik aminosav királis központjának epimerizációjához vezet, az aktivitás lényeges csökkenésével [lásd J.C.J. Barna et. al.: The Journal of Antibiotics 37, (10), 1204-1208 (1984)]. A jelen találmány szerint de-mannozilezett teikoplanin származékokat jó hatásfokkal állíthatunk elő a teikoplanin komplexből választott szubsztrátum, az egyes komponensek bármyilen arányú elegye, vagy bármely komponens mikrobiológiai transzformációjával, Nocardia orientalis NRRL 2450 vagy Streptomyces candidus NRRL 3218 tenyészeteivel, ezek természetes mutánsaival vagy variánsaival, amelyek ugyanezt a tulajdonságot mutatják, azaz, hogy képesek elhasítani a glikozidos kötést a teikoplanin molekulában az ágiikon és a D-mannóz között A hasítás kivitelezhető mind a mosott micéliummal, mind az abból készült sejtmentes preparátummal. A Nocardia orientalis törzs fiziológiai és morfológiai tulajdonságait a 3 076 099 sz. USA szabadalmi leírás, a Streptomyces candidus törzsét pedig a 3 387 786 sz. USA szabadalmi leírás ismerteti. Az említett törzsek közül az elsőt az újabb cikkekben Streptomyces orientalis NRRL 2450 néven is említik [lásd. S.K. Chung et. al., The Journal of Antibiotics, 39 (5), 652-659 (1986)]. Az említett törzsekből a mi belső kódjainkat viselő mintákat (A/156 és S/802) újból letétbe helyeztünk 1987. június 10-én az ATCC-nál (American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20852, USA) a Budapesti Egyezmény (Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure) által meghatározott körülmények között, mikor is az ATCC 53 630 és 53 629 sorszámot kapták. Amikor a teikoplanin komplexet, vagy a komponensek keveréket használják, a mikrobiológiai transzformációban szubsztrátként, akkor a kapott öt, I általános képletű de-mannozil származék keveréke, bármilyen arányban. Ezen keverékek előállítása is 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
