200487. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új demetil-avermektin-származékok előállítására
1 HU 200487 B 2 nem-természetes avermektin retenciós idő avermektinek oligomicin-A retenciós idő ciklopentil-B2 0,94 ciklopentil-A2 1,23 ciklopentil-Bl 1,99 ciklopentil-Al 2,62 Aretenciós idők napról-napra 1-2 percet változnak, az oligomicin-A általában 12,5 és 14 perc között jelenik meg. Az elmondottak szemléltetésére az alábbiakban példákat adunk meg. 1. példa A demetilált ciklohexil-avermektinek előállításához 500 milliliteres horpasztott lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt lefagyasztott S. avermitilis HL-026 (ATCC 53568) törzzsel oltunk be, és a tenyészetet 28-30 “C hőmérsékleten rázatjuk 24-28 órán keresztül. 1 ml így nyert tenyészettel oltunk be egy 300 milliliteres lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt (literenkén 0,6 g glutaminsavat tartalmaz). 28-30 °C hőmérsékleten inkubálunk 96 órán át rázatva, majd literenként 0,2 g ciklohexán-karbonsavat (nátriumsó alakjában) és 0,1 mM szinefungint adunk a tenyészethez. A 312 órás minta HPLC kromatogrammja demetilált ciklohexil-avermektin-B2, A2 és B1 jelenlétét bizonyítja; a demetil-származékoknak a megfelelő ciklohexil-avermektinek retenciós idejéhez viszonyított retenciós idői a következők: di-demet-CH-B2/CH-B2 = 0,470 mono-demet-CH-B2/CH-B2 = 0,515 di-demet-CH-A2/CH-A2 = 0,466 mono-demet-CH-A2/CH-A2 = 0,520 di-demet-CH-B 1 /CH-B1 = 0,486 mono-demet-CH-Bl/CH-Bl = 0,517 CH = ciklohexil demet = demetil 2. példa A demetilált ciklopentil-avermektinek előállításához 500 milliliteres horpasztott lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt lefagyasztott S. avermitilis HL-026 (ATCC 53568) törzzsel oltunk be, és a tenyészetet 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 24-28 órán keresztül. 1 ml így nyert tenyészettel oltunk be egy 300 milliliteres lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt (literenként 0,6 g glutaminsavat tartalmaz). 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 96 órán át, majd literenként 0,4 g ciklopentán-karbonsavat (nátriumsó alakjában) és 0,1 mM szinefungint adunk a tenyészethez. A 312 órás minta HPLC kromatogrammja demetilált ciklopentil-avermektin B2, A2 és B1 jelenlétét bizonyítja; a demetil-származékoknak a megfelelő ciklopentil-avermektinek retenciós idejéhez viszonyított retenciós idői a következők: di-demet-CP-B2/CP-B2 = 0,519 mono-demet-CP-B2/CP-B2 = 0,564 di-demet-CP-A2/CP-A2 = 0.513 mono-demet-CP-A2/CP-A2 = 0,567 di-demet-CP-B 1/CP-B1 = 0,538 mono-demet-CP-Bl/CP-Bl = 0,593 CP = ciklopentil 3. példa A demetil-ciklobutil-avermektinek előállításához 500 milliliteres horpasztott lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt lefagyasztott S. avermitilis HL-026 (ATCC 53568) törzzsel oltunk be, és a tenyészetet 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 24-28 órán keresztül. 1 ml így nyert tenyészettel oltunk be egy 300 milliliteres lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt (literenkén 0,6 g glutaminsavat tartalmaz). 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 96 órán át, majd literenként 0,4 g ciklobután-karbonsavat (nátriumsó alakjában) és 0,1 mM szinefungint adunk a tenyészethez. A 312 órás minta HPLC kromatogrammja demetil-ciklobutil-avermektin B2, A2 és B1 jelenlétét bizonyítja; a demetil-származékoknak a megfelelő ciklobutil-avermektinek retenciós idejéhez viszonyított retenciós idői a következők: di-demet-CB-B2/CB-B2 = 0,581 mono-demet-CB-B2/CB-B2 = 0,627 di-demeí-CB-A2/CB-A2 = 0,570 mono-demet-CB-A2/CB-A2 = 0,626 di-demet-CB-B 1/CB-B1 = 0,574 mono-demet-CB-Bl/CB-Bl = 0,623 CB = ciklobutil 4. példa A demetil-2-pentil-avermektinek előállításához 500 milliliteres lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt lefagyasztott S. avermitilis HL-026 (ATCC 53568) törzzsel oltunk be, és a tenyészetet 28-30 “C hőmérsékleten rázatjuk 24—28 órán keresztül. 1 ml így nyert tenyészettel oltunk be egy 300 milliliteres lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt (literenként 0,6 g glutaminsavat tartalmaz). 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 96 órán keresztül, majd literenként 0,4 g 2-metil-valeriánsavat (nátriumsó alakjában) és 0,1 mM szinefungint adunk a tenyészethez. A 312 órás minta HPLC kromatogrammja demetil-2-pentil-avermektin B2 és A2 jelenlétét bizonyítja; a demetil-származékoknak a megfelelő 2-pentil-avermektinek retenciós idejéhez viszonyított retenciós idői a következők: di-demet-IP-B2/IP-B2 = 0,497 mono-demet-IP-B2/IP-B2 = 0,541 di-demet-IP-A2/IP-A2 = 0,493 mono-demet-IP-A2/IP-A2 = 0,545 IP = 2-pentil 5. példa A demetilált l-metil-3-butenil-avermektinek előállításához 500 milliliteres horpasztott lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt lefagyasztott S. avermitilis HL-026 (ATCC 53568) törzzsel oltunk be, és a tenyészetet 28-30 *C hőmérsékleten rázatjuk 24—28 órán keresztül. 1 ml így nyert tenyészettel oltunk be egy 300 milliliteres lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt (literenként 0,6 g glutaminsavat tartalmaz). 28-30 °C hőmérsékleten rázatjuk 96 órán keresztül, majd literenként 0,4 g 2-metil-4-penténsavat (nátriumsó alakjában) és 0,1 mM szinefungint adunk a tenyészethez. A 312 órás mint HPLC kromatogrammja 5 10 15 20 25 30 35 40 45 t 50 55 60 65 9
