200477. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-aldehidek előállítására
9 HU 200 477 A 10 4. példa D-Fenilalanil-L-prolil-L-argimn-aldehid-szulfát előállítása Mindenben a 3. példa szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy 43 g 10%-os, előzőleg semlegesre mosott csontszenes palládiumot használunk katalizátorként. 125,1 g (83,2%) cím szerinti terméket kapunk, mely azonos minőségűi az 1. példa termékével. 5. példa N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-L-argimn-aldehid-szulfát előállítása 20,5 g (0,03 mól) N-benziloxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolil-N°-benziloxi-karbonil-L-arginin-aldehidet feloldunk 214 ml etanolban, hozzáadunk 110 ml ionmentes vizet, 60 ml 1 n kénsavat (0,03 mól) és 3 g 10%-os csontszencs palládium katalizátort. Az elegybe hűtés közben, 6-8 *C közötti hőmérsékleten finomat eloszlatott hidrogéngázt vezetünk be. A reakció előrehaladását vékonyrétegkromatográfiával követjük ctilacctát-piridin-ccctsav-víz (25 : 20: 6: 11) rendszerben, amelyben a kiindulási anyag, a köztitermék és a végtermék Rf értéke kb. 0,9,0,7, ill. 0,4. A reakció kb. 2 óra alatt lejátszódik. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és háromszor 30 ml ionmentes vízzel mossuk. A szürletct és a mosófolyadékot egyesítjük, majd rotációs bcpárlóban max. 25 ’C-on bcpároljuk kb. 100 ml-re és kétszer 50 ml diklór-mctánnal kirázzuk. A vizes oldatból a szerves oldószer nyomait desztillálóval eltávolítjuk, a maradékot ionmentes vízzel kb. 200 ml-re hígítjuk és a pH-t ellenőrizzük, hogy 4 körül van-e. Szükség szerint módosítjuk 0,1 n kénsavval, vagy OH- ciklusú ioncserélő gyantával (pl. AG 1x8), majd lefagyasztjuk és liofilizáljuk. Hozam: 12,5 g (75%). Rf = 0,35-0,45 (etilacetát-piridin-ccctsav-víz = = 25:20:6:11) [a]D =-126,0±5* (c=l, vízben) Vékonyrétegkromatográfiával mért össz-szennyezés -1%, HPLC-vcl mért szennyezés 2-4%. A kiindulási N-bcnziloxi-karbonil-N-mctil-D-fcnilalanil-L-prolil-N°-bcnziloxi-karboinil-L-arginin-aldehidet az alábbiak szerint állíthatjuk elő: 1. lépés N-benziloxi-karbonil-N-mctil-D-fenilalanil-L-prolil-N°-benziloxi-karbonil-L-arginin-laktám 42,95 g (0,11 mól) lerc.-butiloxi-karboniI-NG-bcnziloxi-karbonil-L-arginin laktámot szuszpcndálunk 110 ml vízmentes kloroformban és állandó keverés közben hozzáadunk 275 ml sósavas etilacetátot (töménysége 11-15 g/100 ml). A reakcióclegyct kb. 3 órán át keverjük szobahőmérsékleten, a reakció végpontját vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal határozzuk meg etilacetát-piridin ecetsav-víz (60 : 20 : 6 : 11) oldószerelcgybcn (a kiindulási anyag Rr értéke kb. 0,9, míg a termék Rf értéke 0,3). A redukció végén 400 mi dietiléterrel hígítjuk az eícgyct, a kivált kristályos anyagot szűrjük, kétszer 100 ml dictil-étcrrcl és kétszer 50 ml acetonnal mossuk, majd vákuum-exszikkátorban helyezzük foszforpentoxid és kálium-hidroxid mellé. Kb. 1-2 óra száradás után a kapott laktám-sót (kb. 0,1 mól) feloldjuk 100 ml vízmentes dimctilformamidban és felhasználásig -15 ’C-on tároljuk, majd az alábbi vegyes anhidridhez adjuk: N-benziloxi-karbonil-N-metil-D-fenilalanil-L-prolin felszabadítása: 50,9 g (0,1 mól) N-bcnziloxi-karbonil-N-metil-D-fcnilalanil-L-prolin-ciklohexil-ammóni-u m-sót feloldunk 200 ml dietil-éterben és 120 ml 1 n kénsavban. A dietil-éteres fázist kétszer 50 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson max. 35 'C-on bcpároljuk, míg sűrű olajat kapunk. A maradékot (kb. 0,1 mól) 170 ml vízmentes dimctilformamidban oldjuk -15 ’C-ra hűtjük és keverés közben hozzáadunk 11,2 ml (0,1 mól) N-metil-morfolint, majd ezen a hőmérsékleten tartva becsepegtetünk 13,2 ml i-butiloxi-karbonil-kloridot 3-5 perc alatt. További 5- 10 perces keverés után a keletkezett vegyes anhidridhez adjuk az aminokomponens fenti dimetilformamidos szuszpenzióját, majd erőteljes keverés közben -20 és -25 'C között 35 ml trictilamint adagolunk a rcakcióclegyhcz. A gőztér pH-ját ellenőrizzük (pH 8 felett legyen) és szükség esetén további trictilamint adagolunk. A reakcióclegyct egy órán át keverjük -15 *C-on, egy órán át 0 *C-on, majd 200 ml benzollal hígítjuk és 150 ml vizet adunk hozzá. A fázisokat elválasztjuk és a vizes fázist háromszor 30 ml benzollal kivonatoljuk. Az egyesített benzolos oldatokat kétszer 50 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson max. 40 'C-on bcpároljuk. Az olajos maradékot feloldjuk 75 ml 2 : 1 arányú éter-tetrahidrofurán clegyben és az alábbi szűrőágyra visszük: 300 g (ötszörös mennyiségű) Kicsclgel-60 abszorbenst éterben szuszpendáíunk és szűrőágyat készítünk 3 : 1 átmérő/magasság arányban. A szennyező felső foltot 95 : 5 arányú éter-tetrahidrofurán eleggyel, a kívánt terméket tiszta tctrahidrofuránnal eluáljuk. A frakciók anyagtartalmát vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük etilacctát-piridin-ecctsav-víz (480:20:6:11) rendszerben, a kívánt termék Rf értéke 0,71-0,75. Az egyesített frakciókat csökkenteti nyomáson max. 35 ‘C-on bcpároljuk és vagy azonnal felhasználjuk, vagy szárazjég között tároljuk. Hozam: 58,8 g (85%). Rt = 0,71-0,75 (ctilacclát-piridin-ecctsav-víz = = 480 : 20 : 6:11) 20 [a]D = +13,5' (c = 1, tetrahidrofuránban) 2. lépés N-benziloxi-karbonil-N-mctil-D-fcnilalanil-L-prolil-N0- -bcnziloxi-karbonil-L-arginin-aldchid ’ 34,14 g (0,05 mól) N-bcnziloxi-karbonil-N-mclil-D- feniIalanil-L-proIil-N°-bcnziloxi-karbonil-L-arginin- Iaktámot (5. példa, 1. lépés) feloldunk 0*C-ra hűtött 150 ml vízmentes tetrahidrofuránban, lehűtjük -20 *C- ra és 5-10 perc alatt keverés közben hozzáadunk 0,0375 mól lílium-alumínium-hidridet tetrahidrofuránban oldva. A redukció előrehaladását vékonyréteg kromatográfiával követjük etilacetát-piridin-ecctsav-víz (240 : 20 : 6 : 11) rendszerben (a kiidnulási lakiám Rt értéke 0,8, míg az aldehid Rf értéke 0,5). Szükség szerint adagolunk további lílium-alumínium-hidridet, majd a reakció végén az clcgyct részletekben állandó keverés közben 320 ml, előzőleg 2-4 'C-ra hűtött, 1 n kénsavoldatba öntjük. A végső pH 2-3 közt legyen, ezt szükség szerint további 1 n kénsav adagolásával állítjuk be. Ha csapadék vált ki, kiszűrjük és az oldatot vízzel kezdődő 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
