200477. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-aldehidek előállítására
3 HU 200477 A 4 vegyes anhidridcs kondenzációja során az arginin-laktámot in situ szabadítjuk fel a reakcióé légy ben oly módon, hogy a bázist utólag adagoljuk a reakcióelegyhez. Ilyen körülmények közölt az in situ felszabaduló laktám azonnal, in statu nasccndi reagál a vegyes anhidriddel védett tripeptid-laktámmá, és így elkerülhető a racemizációt előidéző bázikus közeg kialakulása. Továbbá felismertük, hogy ha a fenti módon kapott III általános képletű védett tripcptid-laklám redukálása során keletkező lítium-alumínium-hidriddel alkotott komplexet a 192 646 számú szabadalmi leírásban leírtaktól eltérően oly módon bontjuk meg, hogy a reakcióelegyet adagoljuk a feleslegben vett híg, célszerűen 1 normál, hideg (0-5 *C-os) kénsav-oldathoz (és nem fordítva!), biztosítani tudjuk az elegy savas pH-ját, Ezáltal a védett tripeptid-aldchid racemizációja elkerülhető, illetve lényegesen csökkenthető. További felismerésünk abban áll, hogy a fenti módon előállított II általános képletű védett tripeptid-aldchid hidrogenolízisét kénsav felesleg jelenlétében alacsony hőmérsékleten, 10 'C alatt, előnyösen 6-8 *C-on kell végrehajtani. Kísérleti adataink szerint a Z-D-Phe-Pro-Arg(Z)-H hidrogenolízisét különböző hőmérsékleteken 1 mólckvivalcns kénsav jelenlétében végezve, a céltermék vékonyréteg kromalográfiával kimutatható szennyezettsége a következőképpen alakult: 40 *C-on végezve 17%, szobahőmérsékleten (20-25 'C) 10%, 6-10 'C-on végezve 4%, a termék HPLC-vcl kimutatható DLD-izomer tartalma rendre: 12%, 5%, illetve 2-3%; azaz az össz-szennyezés mennyisége: 29%, 15% illetve 6-7%. Tehát a hidrogenolízist hidegen végezve a melléktermékek mennyisége lényegesen csökkent, ugyanakkor a hidrogenolízis ideje számottevően nem nőtt a hőmérséklet csökkentésével. Ha a hidrogenolízist hidegen és kénsav felesleges jelenlétében végezzük, további igen nagy előny, hogy a 0,39-0,44 Rj-értékű melléktermék eliminálódik és nincs szükség a végpont pontos detektálására. Kísérleteink szerint, ha a Z-D-Phc-Pro-Arg(Z)-H hidrogenolízisét 1,5-1,7 mólckvivalcns kénsav jelenlétében tetrahidrofuránban 6-8 *C-on végezzük, a fenti Rrértékű melléktermék 1 óra „lúlhidrálás” után sem mutatható ki. Továbbá, célszerű az egész eljárás során végig kénsavat használni, mert például sósav alkalmazása esetén a szulfát-só szennyeződhet klorid-ionokkal. A fenti módon kivitelezett reakciók eredményeképpen az I általános képletű végtermékben a DLD-izomer mennyisége maximum 2-4%, míg az egyéb szennyezések (tripeptid-sav és -alkohol) 1% alatti mennyiségben keletkeznek, így nincs szükség a köztitermékek kromatográfiás tisztítására. A fentiek alapján a találmány javított eljárás a gyógyszerkészítéshez megfelelő tisztaságú I általános képletű tripcptid-aldchidck - ahol R, Phc, Pro és Arg jelentése a fenti - előállítására a IV képletű laktám és a V általános képletű dipeptid vegyes anhidriden keresztüli kondenzálása, a kapott III általános képletű tripeptid-laktám lílium-alumínium-hidrides redukciója, és a kapott II általános képletű védett tripeptid-aldchid kénsav jelenlétében végzett hidrogenolízise útján, amely abban áll, hogy ai) a IV képletű - ahol Z jelentése a fenti - N° védett L-arginin-laktám és az V általános képletű dipeptid - ahol R, Z, Phe és Pro jelentése a fenti - vegyes anhidrides kondenzációja során a bázist utólag adagoljuk a fenti komponensek clcgyéhez, majd a kapott III általános képletű - ahol R, Z, Phe, Pro és Arg jelentése a fenti - védett tripeptid-laktám redukcióját követően a keletkező komplexet a rcakcióclegy feleslegben vett 1 normál kénsavoldatba 0-5 'C-on történő adagolásával bontjuk meg, majd a kapott II általános képletű - ahol R, Z, Phe, Pro és Arg jelentése a fenti - védett tripeptid-aldehid hidrogenolízisét 10 *C alatti hőmérsékleten, 1-2 mólekvivalens kénsav jelenlétében végezzük, vagy aj a III általános képletű - ahol r, Z, Phe, Pro és Arg jelentése a fenti - védett tripeptid-laktám redukcióját követően a keletkező komplexet a reakcióelegy 0-5 ‘C-os, feleslegben vett 1 normál kénsav-oldatba történő adagolásával bonjuk meg, és a kapott II általános képletű - ahol R, Z, Phe, Pro és Arg jelentése a fenti - védett tripeptid-aldehid hidrogenolízisét 10 *C alatti hőmérsékleten, 1-2 mólckvivalcns kénsav jelenlétében végezzük, vagy aj a II általános képletű - ahol R, Z, Phe, Pro és Arg jelentése a fenti - védett tripeptid-aldehid hidrogenolízisét 10 'C alatti hőmérsékleten, 1-2 mólekvivalens kénsav jelenlétében végezzük. A találmány szerinti eljárás értelmében előnyösen az alábbiak szerint járunk el: A tcrc-butiIoxi-karbonil-N°-benziloxi-karbonil-L- arginin-laktámról ismert módon eltávolítjuk a terc-butiloxi-karbonil-védőcsoportot. A kapott IV képletű N°-benziloxi-karbonil-L-arginin-laktám-klórhidrátot dimctilformamidos oldatban -15 és -20 *C közötti hőmérsékleten tartjuk, és ezt adjuk az V általános képletű dipeptid (bcnziioxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolin illetve az N-mctil-N-bcnziloxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolin) klór-szénsav-izobutil-észterrel képzelt vegyes anhidridjéhez. A bázist, előnyösen trietilamint, utólag adagoljuk a reakcióelegyhez. A kapott terméket - kívánt esetben - szilikagélágyon való gyors átszűrésscl tisztítjuk. A reakciósorrend fenti - az ismertektől eltérő - megválasztásával nincs szükség a védett tripcptid-laklám költséges oszlopkromatogárifás tisztítására. A fenti módon kapott III általános képletű védett tripcplid-laktámot vízmentes tetrahidrofuránban lítium-alumínium-hidriddcl redukáljuk. A kapott komplexet oly módon bontjuk meg, hogy a rcakcióelegyet adagoljuk hűtés közben, 2-4 'C-on, a feleslegben vett híg, célszerűen 1 normál kénsav-oldathoz. A végső pH 2-3 értéket esetleges további kénsav hozzáadásával állítjuk be. A továbbiakban a rcakcióelegyet a már ismert módon dolgozzuk fel. A kapott II általános képletű védett tripcplid-aldchidct géiszűrésscl, például szilikagélágyon való átszűréssel tisztítjuk. A hidrogenolízist célszerűen szerves poláris oldószerben, előnyösen tetrahidrofuránban, rövidszénláncú alkanolban, így metanolban, etanolban, izopropanolban, célszerűen etanolban hajtjuk végre. Előnyös, ha a hidrogénezést nem zárt rendszerben, hanem a hidrogéngáz álbuborékollalásával végezzük. Célszerű a hidrogéngázt finoman eloszlatva átbuborékoltatni a reakcióclegyen. A hidrogéngáz finom eloszlatását például G2- szűrőn való átvezetéssel biztosíthatjuk. A találmány egyik előnyös kiviteli módja szerint úgy járunk el, hogy a megfelelő tisztaságú, fenti módon előállított II általános képletű védett tripcptid-aldehidet tetrahidrofuránban feloldjuk, és hozzáadjuk az 1,5—1,7 mólckvivalcns 1 normál kénsavat tartalmazó lehűtött vizes katalizálor-szuszpcnziőhoz. A szerves oldószer és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
