200477. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-aldehidek előállítására
5 HU 200477 A 6 a vizes rész aránya 70-50 : 30-50, előnyösen 60 :40, Katalizátorként előnyösen 10-30 súly %-nyi 10%-os csontszenes palládiumot vagy platinát alkalmazunk. A hidrogénezést hűtés mellett, 6-8 ‘C*on, finoman eloszlatott hidrogéngáz átbuborékoltatásával végezzük. A reakció előrehaladását vékonyréteg kromatográfiával követjük. A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös kiviteli módja szerint a kiindulási védett tripcptid-aldehidet tetrahidrofuránban oldjuk, és kalalizátoricént bárium-szulfátra vagy alumínium-oxidra, előnyösen bárium-szulfát hordozóra felvitt, 10% palládiumot tartalmazó katalizátort alkalmazunk. A hidrogénezést 6 és 8 *C közötti hőmérsékleten 1,5 mólckvivalens 1 normál kénsav jelenlétében, finoman eloszlatott hidrogéngáz átbuborékoltatásával végezzük. A reakció végbcmenctclét vékonyréteg kromatográfiával ellenőrizzük. A találmány szerinti eljárás egy további előnyös kiviteli módja szerint a kiindulási védett tripeptidet ctanolban oldjuk, és hozzáadjuk az 1 mólckvivalens 1 normál kénsavat tartalmazó, lehűtött, vizes, 10%-os csontszencs palládium katalizátor szuszpenzióhoz. A hí drogé nézést 6-8 *C közötti hőmérsékleten, finoman eloszlatott hidrogéngáz átbuborékoltatásával végezzük, és vékonyréteg kromatográfiával követjük. A rcakcióelcgyből a terméked egyszerűen kinyerhetjük oly módon, hogy a katalizátor kiszűrése után a vizes szerves oldószeres clegyből 40 'C alatti hőmérsékleten, előnyösen 25-30 *C-on, a szerves oldószert kidcsztilláljuk, a vizes oldatot pedig vagy közvetlenül, vagy a pH beállítása után (pH4) liofilizáljuk. A pH beállítását célszerűen hidroxil-ciklusú ioncscrélőgyantával, illetve 0,1 normál kénsavval végezzük. A találmány szerinti eljárást félüzemi méretben is kivitelezve a kapott termék (D-fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát illetve N-metil-D-fcnilalanil-L-prolil-L-arginin-aldchid-szulfál) vékonyréteg kromatogrammon mérhető tripeptid-sav és tripcptid-alkohol szennyezése max, 1%, a HPLC-vel mérhető D-L-D-izomer tartalma pedig max. 2-4%. Az ismert eljárásokkal előállított végtermékben esetenként mért 15-25%-kal szemben így az össz-szennyezés 3-5%-ra csökkenthető, amely a gyógyszerkövetelményeknck megfelel. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákon szemléltetjük. A példákban megadott Rf értékeket szilikagél (Kiesclgel, G, Reanal, Budapest) vékonyréteg kromatográfiával határoztuk meg az adott oldószerclegyckben. Előhívás: száradás után a klórozott lemezeket o-tolidin oldattal hívtuk elő (2,5 g-ot o-tolidin és 10 ml ecetsav 500 ml vízben oldva). 1. példa D-Fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfál előállítása 201 g (0,3 mól)benziloxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolil-N°-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-aldchidet feloldunk 2 liter tetrahidrofuránban szobahőmérsékleten. Egyidejűleg 60 g 10%-os csontszenes palládiumot szuszpcndálunk 0,6 liter ionmentes vízben és hozzáadunk 900 ml 1 n kénsavat (0,45 mól). A katalizátoros szuszpenziót 2-5 *C-ra hűtjük és keverés közben hozzáadjuk a védett tripeptidct-aldehid tetrahidrofurános oldatát és még 0,2 liter ionmentes vizet, majd 6-8 *C-on tartva az elegyet átbuborékoltatással, keverés közben hidrogén gázt vezetünk be. A reakció előrehaladását vékonyrétegkromatográfiás módszerrel követjük etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 : 20 : 6 : 11) rendszerben (a kiindulási anyag, a köztitermék és a végtermék Rf értéke 0,92-0,96; 0,38-0,44, illetve 0,0-0,10). A reakció 3-4 óra alatt válik teljessé. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük és háromszor 300 ml ionmentes vízzel mossuk. A szürlctct és a mosófolyadékot egyesítjük, majd rotációs bepárlóban csökkentett nyomáson 25-30 *C-on a tetrahidrofuránt kidcsztilláljuk. A maradék vizes oldatot kétszer 300 ml diklór-metánnal kirázzuk, majd a vizes fázis kémhatását ellenőrizzük; ha a pH a 4-es értéktől eltér, akkor 0,1 n kénsavval, illetőleg OHT ciklusú ioncserélő gyantával (pl. AG 1x2) a pH-értékct 4-re beállítjuk. Az oldat térfogatát ionmentes vízzel 1,5 literre kiegészítjük, majd liofilizáljuk. 125 g (83,2%) cím szerinti terméket kapunk. Rf = 0,52-0,57 (ctilacctát-piridin-ccctsav-víz = = 25:20:6:11) [a]” =-117'(C= 1, vízben) Vékonyrétcgkromatográfiásan mért össz-szennyezés kb. 1%, a HPCL-vcl mert D-L-D izomer kb. 2-3%. A kiindulási bcnziloxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolil-NG-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-aldchid-et az alábbiak szerint állíthatjuk elő: 1. lépés Bcnziloxi-karbonil-D-fcniIalanil-L-prolil-N°-benziloxi-karbonil-L-arginin-laktám 425,5 g (1,1 mól) tcrc-butiloxi-karbonil-N°-bcnziloxi-karbonil-L-arginin laktámot (192 646 sz. magyar szabadalmi leírás) 1300 ml vízmentes kloroformban szuszpcndálunk. Keverés és jeges vizes hűtés közben hozzácscpcgtclünk 1300 ml 189 g/100 ml (kb. 5 n) töménységű sósavas clilacctátot olyan ütemben, hogy a hőmérséklet 15 *C fölé ne emelkedjen. Rövidesen oldódás, majd kristályos csapadék kiválás kezdődik. A szuszpenziót 3 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd 3000 ml szárított élcr-aceton 1:1 arányú elcggyel hígítjuk. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, kétszer 1000 ml acetonnal és 500 ml éterrel mossuk, majd szilárd káliumhidroxid és foszforpentoxid mellett vákuum-exszikkátorban szántjuk. Kb. egy óra szárítás után a kapott NG-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-laktám-hidrokloridot 1000 ml vízmentes dimctilformamidban oldjuk, -15 és -20 *C közötti hőmérsékletre hűtjük és az alábbi vegyes anhidridhez adjuk: 396 g (1 mól) N-bcnziloxi-karbonil-D-fenilalanil-L-prolint [E. Nicolaidcs és misai: J. Med. Chcm 77,74 (1968) és 192 646 számú magyar szabadalmi leírás] feloldunk 1000 ml vízmentes dimctilformamidban és 111 ml (1 mól) N-mctil-morfolint adunk hozzá. Majd -15 'C-ra hűtjük és ezen a hőmérsékleten, keverés közben 5-10 perc alatt bccscpegtetünk 132 ml (1 mól) klórszénsav-izobutil-észtcrt. A vegyes anhidridet 10 perc keverés után -20 és -25 *C közé hűtjük, és egyesítjük az N°-bcnziloxi-karboniI-L-arginin-laktám-hidroklorid fenti dimetilformamidos oldatával. Ezen a hőmérsékleten hozzácscpcgtclünk a rcakcióelcgyhez 308 ml (2,2 mól) trietilamint, kb. 30 perc alatt, majd -20 és -15 *C közötti hőmérsékleten további 1 óráin át keverjük a szuszpenziót. A gőztér kémhatását nedves pH-papírral ellenőrizzük: ha a pH 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
