200456. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-oxo-1[(szubsztituált szulfonil)-amino-karbonil]-azetidinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
11 HU 200456 B 12 -oxo-l(2H)-pirimidinil]-karbonil]-amino]-szulfonil]-amino]-karbonil]-2-oxo-3-azetidinil]-amino]-2-oxo-etilidén]-amino]-oxi]-2-metil-propionsav-(difenil-metil)-észtert, és 0 °C- on hozzácsepegtetünk 65 ml trifluor-ecetsavat. Egy órányi keverés után az illékony anyagokat vákuumban elpárologtatjuk, az olajos maradékot dietil-éterrel eldörzsöljük, és az igy kapott szilárd ~ anyagot szűrjük, dietil-éterrel mossuk, majd vákuumban megszáritjuk. Ezután a kapott anyagot vízben szuszpendáljuk és 2 n nátrium-hidroxid-oldattal 6-ra állítjuk a pH-ját. Liofilizálva 8,6 g nyersterméket kapunk, amelyet hét részletben Organogen adszerbensen kromatografálunk. Az igy kapott termék tömege liofilizálás után 2,5 g. Ismételten kromatografálva a cim szerinti vegyület tömege 0,66 g, és 300 °C felett olvad. Az 1. és 2. példák szerint előállított ß-laktámoknak a kővetkezőkben leirt metodikával meghatároztuk a minimális inhibiciós koncentrációját (MIC), és a különböző mikroorganizmusokra kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze. A vizsgálandó mikroorganizmusokat körülbelül 15-20 ml antibiotikum meghatározó tápoldatban (Antibiotic Assay broth; Difco) tenyésztjük, amelyet (kémcsövekben) BHI (Difco) ferde agárról származó egy kacsnyi mikroorganizmussal oltunk be. A beoltott kémcsöveket 37 °C-on 18-20 óra hosszat inkubáljuk. Ezeket a tenyészeteket milliliterenként 109 telepet formáló egységet (colony forming units; továbbiakban CFU) tartalmazóknak fogadjuk el. A tenyészeteket 1:100 arányban hígítva 107 CFU inokulum végkoncentrációra állítjuk be; a hígításokat K-10 folyékony táptalajjal végezzük. A K-10 élesztőkivonatot tartalmazó húsleves táptalaj, amelynek összetétele: Húskivonat 1.5 g Élesztőkivonat 3.0 g Pepton 6.0 g Glükóz 1.0 g Desztillált vízzel kiegészítve A K-10 agar összetétele: 1 literre. Húskivonat 1.5 g Élesztőkivonat 3.0 g Pepton 6.0 g Glükóz 1.0 g Agar 15.0 g Desztillált vízzel kiegészítve 1 literre. A vizsgálandó vegyületeket feloldjuk megfelelő hígítóban, és 1000 pg/ml koncentrációra állítjuk be. Kétszeres higitásokat készítünk K-10 húsleves táptalajjal 1000 jug/ml-től 0,5 Mg/ml-ig terjedő tartományban. Az egyes hígításokból 1,5 ml-t teszünk külön-külön szögletes Petri-csészékbe, amelyekhez 13,5 ml K-10 agart adunk. A vizsgált vegyületek végkoncentrációja az agarban 100 pg/ /ml-tól 0,05 Mg/ml-ig terjed. A mikroorganizmusok növekedési kontrolljaként csak agart tartalmazó lemezeket készítünk, és ezeket a vizsgálati lemezek előtt és után leoltjuk. Az egyes lemezeken az agar felületére a Denley Multipoint Inoculator segítségével (ami az egyes mikroorganizmusokból körülbelül 0,001 ml-t adagol) juttatjuk a mikroorganizmusokat, így az agar felületén 104 CFU végső inokulum szintet érünk el. A lemezeket 37 °C-on 18 óra hosszat inkubáljuk, majd meghatározzuk a MlC-értékeket. A MIC a vegyületnek a mikroorganizmus növekedését még gátló legkisebb koncentrációja. 5 10 15 20 25 30 35 8
