200342. lajstromszámú szabadalom • Enzimatikus eljárás L-2-amino-4-(hidroxi-metil-foszfinil)-vajsav előállítására
HU 200342 B lása megfelelő sebességgel menjen végbe. Transzaminázként bármely, a kereskedelemben kapható transzamináz enzimkészítmény alkalmazható. Eljárhatunk úgy is, hogy egy olyan nyers enzimoldatot alkalmazunk, amelyet úgy állítunk elő, hogy transzamináz termelő mikroorganizmusként aktinomicetát, baktériumot, penészt vagy élesztőt tenyésztünk, és a kapott tenyészlében a mikroorgavábbá a nyers enzimkészítmény vizes oldatát. Vizes nyers enzimoldatként alkalmazhatjuk a dezintegrált mikroorganizmus sejtek vizes extraktumát. A találmány szerinti eljárásban alkalmazhatjuk az enzim tisztított formájának vizes oldatát is. Ismeretes, hogy egy enzim vagy mikroorganizmus működési hatékonysága fokozható úgy, hogy immobilizáljuk. A találmány szerinti eljárásban ilyen ismert módon immobilizált transzaminázok vagy transzaminázt termelő mikroorganizmusok alkalmazhatók, amennyiben ezek rendelkeznek azzal a képességgel, hogy OMPB-ből L-AMPB-t termelnek. A találmány szerinti enzimatikus reakciót az OMPB L-AMPB-vé történő átalakítására transzamináz segítségével előnyösen 7,5 vagy ennél magasabb pH-értéknél, előnyösen 8,0 és 9,0 közötti pH- értéknél hajtjuk végre. A reakciókörülményeket, azaz a hőmérsékletek és pH-értéket úgy választjuk meg, hogy az az enzimatikus reakcióban alkalmazott transzamináz optimális értékének feleljen meg. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiviteli módja szerint 4-(hidroxi-metil-foszfonil)-2-oxovajsavat azaz OMPB-t egy vagy több transzaminázzal vagy transzaminázt termelő mikroorganizmussal kezelünk L-glutaminsav vagy sója és L-aszparaginsav vagy sója mint amino-donor jelenlétében. Transzaminázként előnyösen olyan enzimrendszert alkalmazunk, amely egyrészt tartalmaz egy olyan enzimet, amely 2-keto-glutársavat L-aszparaginsav mint amino-donor jelenlétében glutaminsavvá alakító transzamináz aktivitással rendelkezik, azaz olyan enzimet, amelynek a transzamináz aktivitása az úgynevezett GOT-aktivitás kategóriájába esik, tartalmaz egy olyan második enzimet, amelynél OMPB-t L-glutaminsav mint amino-donor jelenlétében L-AMPB-vé alakítani képes transzamináz aktivitással rendelkezik. A találmány szerinti eljárásban előnyösen olyan mikroorganizmust alkalmazunk, amely egy olyan enzimrendszert képes termelni, amely nem csak 2-keto-glutársavat L-aszparaginsav mint amino-donor jelenlétében glutaminsawá átalakító enzimaktivitással, azaz úgynevezett GOT-aktivitással rendelkezik, hanem OMPB-t L-glutaminsav mint amino-donor jelenlétében LAMPB-vé alakító transzamináz aktivitással is. Ilyen mikroorganizmus például a Streptomyces hygroscopicus SF-1293 törzs (FERM BP-130 vagy ATCC 21705) vagy ennek mutáns törzse a Streptomyces hygroscopicus NP-50 jelű törzs (lásd például 58589/86 számú közzétett japán szabadalmi bejelentés, FERM P-7804 vagy FERM BP-1368). Feltételezhető, hogy a találmány szerinti eljárás fenti előnyös megvalósítási módjában az OMPB az aminocsoportot az egyik amino-donorként alkalmazott glutaminsavtól (vagy sójától) kapja az emlí9 tett'transzamináz rendszer vagy mikroorganizmus hatására, íjgy L-AMPB képződik, miközben a glutaminsavból 2-keto-glutársawá álakul, míg az aszparaginsav (vagy sója) mint a másik amino-donor aminocsoportját a képződött 2-keto-glutársavnak adja át az olyan transzamináz hatására, amely szintén rendelkezik GOT-aktivitással, így a 2-keto-glut ár sav glutamiasawá regenerálható és az aszparagjinsav (vagy sója) oxálecetsawá, majd végól piroszőlősawá alakítható. Ilyen módon a találmány szerinti eljárásban olyan reakdóelegyet kapunk, amely az L-AMPB-t mint terméket tartalmazza. A találmány szerinti eljárást tehát előnyösen úgy hatjuk végre, hogy 4-(hidroxi-inetil-foszfinil)-2- oxo-vaj savat legalább egy transzaminázzal kezelünk legalább egy amino-donor vegyület jelenlétében, előnyösen L-glutaminsav és L-aszparaginsav vagy ezek nátriumsója jelenlétében, vizes reakcióközegben, amelyben a 4-(hidroxi-metil-foszfmil)-2- oxo-vajsavat és az amino-donor vegyületeket, valamint a transzaminázt feloldottuk, alkálikus pH-nál, előnyösen 7,5-9,0 pH-értéknél és szobahőmérséklet és 60 °C közötti hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárást végrehajthatjuk úgy is, hogy a 4- (hidroxi-metil-foszfinil)-2-oxo-vajsavat legalább egy olyan mikroorganizmussal kezeljük vagy reagáltatjuk, amely legalább egy transzaminázt képes termelni, legalább egy olyan mikroorganizmussal kezeljük vagy reagáltatjuk, amely legalább egy transzaminázt képes termelni, legalább egy amino-donor vegyület, előnyösen L-glutaminsav és L-aszparaginsav vagy ezek nátriumsója jelenlétében, vizes reakcióközegben, amelyben a 4-(hidroxi-metilfoszfinil)-2-oxo-vajsavat és az amino-donor vegyületeket feloldottuk és a mikrooranizmus sejteket szuszpendáltuk, 7,5 és 9,0 közötti pH-értéknél és szobahőmérséklet és 60 °C közötti hőmérsékleten. Ha az eljárást úgy hajtjuk végre, hogy transzamináz termelő mikroorganizmust alkalmazunk, akkor eljárhatunk úgy, hoy a 4-(hidroxi-metil-foszfinil)-2- oxo-vajsavat és az amino-donor vegyületeket a transzamináz termelő mikroorganizmus tenyészközegéhez adagoljuk, amelyben az ép mikroorganizmus sejtek szuszpendált formában vannak jelen, majd a 4-(hidroxi-metil-foszfinil)-2-oxo-vajsav, amino-donor vegyületek és a mikroorganizmus közötti kölcsönhatást hagyjuk lefolyni. A találmány szerinti eljárást úgy is végrehajthatjuk, hogy a 4-(hidroxi-metil-foszfinil)-2-oxo-vajsavat a legalább egy transzaminázt termelni képes mikroorganizmus, transzaminázt tartalmazó extraktumával kezeljük legalább egy amino-donor vegyület, előnyösen L-glutaminsav és L-aszparaginsav vagy ezek nátriumsója jelenlétében, vizes reakcióközegben, amelyben a 4-(hidroxi-metil-foszfinil)-2-oxo-vajsavat és az amino-donor vegyületeket, valamint a mikroorganizmus transzaminázt tartalmazó extraktumát feloldottuk, 7,5 és 9,0 közötti pH-értéknél és szobahőmérséklet és 60 °C közötti hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárást bármilyen módon hajtjuk is végre, a 4 4-(hidroxi-metil-foszfinil)-2- oxo-vajsav kezdeti koncentrációját az enzimatikus reakció megkezdése előtt a vizes reakcióközegben 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
