200342. lajstromszámú szabadalom • Enzimatikus eljárás L-2-amino-4-(hidroxi-metil-foszfinil)-vajsav előállítására
HU 200342 B 5 6 Tenyészközeg Növekedés Légmicélium ' Oldható pigment Tápagar Gyenge növekedés, világos sárga Kevés, fehér Nincs Élesztő-ma-Jó növekedés, Kevés, barnás láta-agar sárgás barna szürke, fokozatosan higroszkópossá válik Nincs Zabliszt-agar Jó növekedés, Bőséges, szürkés világos szürkés zöld barna, fokozatosan higroszkópossá válik Nincs Élesztő-kemé Jó növekedés, Bőséges, barnás nyítő-agar sárgás barna szürke, fokozatosan higroszkópossá válik Nincs Burgonya-Fokozott növeke-Nem figyelhető Nincs-szelet dés, erősen redőzött, világos barna meg Inkubálás hőmérséklete minden tápközeg esetén 28 °C. ül. Fiziológiai tulajdonságok 1. Tenyésztési hőmérséklettartomány: jó növekedés 20-40 °C-on, élesztő-maláta ferde agaron. 30 2. Zselatin elfolyósítás: nem figyelhető meg 20 °C-on 30 napig történő inkubálás alatt 3. Keményítő-hidrolízis: pozitív (erősen) 4. Sovány tej koagulálás: negatív 28 °C-on és 37 °C-on 35 5. Sovány tej peptonizációja: pozitív 28 és 37 °C-on 6. Melaninszerű pigment képzés: negatív IV. Szénforrások hasznosítása 40 (Pridham-Gottlieb agar tápközegen vizsgálva) 1. Hasznosítja: D-glükóz, D-fruktóz, D-mannit, szacharóz és raffinóz 2. Kétséges: D-xilóz, L-arabinóz 3. Nem hasznosítja: mozit és ramnóz 45 A Streptomyces lividans 66 mikrobiológiai jellemzői a következők: Morfológiai jellemzők: Spórák spirál alakú láncát képezi, az érett spórák lánca 10 vagy ennél több spórát tartalmaz, élesztő-maláta-agaron, zabliszt- 50 agaron, keményítő-szervetlen só-agaron és glicerin-aszparagin-agaron. A spórák felülete sima. A légmicéliumok színe élesztő-maláta-agaron, zabliszt-agaron, keményítő-szervetlen só-agaron és glicerin-aszparagin-agaron szürkétől vöröses színig 55 változik. Ezen tápközegeken a telepek hátoldala halvány-sötét szürkés bíbor vagy szürkés vöröses bíbor. Pepton-élesztő-agaron, tirozin-agaron vagy tripton-élesztő-agar folyékony közegen oldható pigment nem képződik. Élesztő-maláta-agaron, 60 zabliszt-agaron keményítő-szervetlen só-agaron és glicerin-aszparagin-agaron kék vagy ibolya színű pigmentet képez, és a pigment színe érzékenyen változik a tápközeg pH-jától függően. Az S. lividans 66 a D-glükózt, L-arabinózt, D-xi- 65 lózt, i-inozitot, D-mannitot, D-fruktózt, ramnózt, szacharózt és a raffmózt hasznosítja. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható bármely olyan enzim, azaz transzamináz, amely képes az OMPB-t L-AMPB-vé transzaminálni egy amino-donor jelenlétében. A találmány szerinti eljárásban előnyösen alkalmazhatók például a kereskedelemben kapható glutaminsav-oxálecetsav-transzamináz (GOT; nemzetközi enzim osztályozási száma EC 2,6,1,1) és a kereskedelemben kapható glutaminsav-piroszőlősav-transzamináz (GPT; nemzetközi enzimosztályozása száma EC 2,6,1,2), valamint az olyan enzimek, amelyek az OMPB-t L-AMPB-vé képesek transzaminálni L-glutaminsav mint amino-donor jelenlétében. Ezek a transzaminázok alkalmazhatók önmagukban vagy kettő vagy több kombinációban. A transzaminázok egy előnyös kombinációja az a rendszer, amely tartalmaz egy olyan transzaminázt, amely képes a 2-kctoglutársavat glutaminsavvá átalakítani aszparaginsav mint amino-donor jelenlétében, azaz áz ilyen transzamináz szintén rendelkezik úgynevezett GOT-aktivitással, továbbá egy második enzimet, amely rendelkezik az OMPB- t glutaminsav mint amino-donor jelenlétében LAMPB-vé átalakító transzamináz-aktivitással. így például alkalmazhatunk úgynevezett GOT-aktivitással rendelkező kereskedelemben kapható glutaminsav-oxálecetsav-transzaminázt (nemzetközi enzimosztályozási szám EC 2,6,1,1) vagy olyan GOT- aktivitással is rendelkező transzaminázt, amelyet GOT-aktivitással rendelkező mikroorganizmusból szokásos módon extraháltunk, így például a Streptomyces hygroszcopicus SF-1293jelű törzsből (lásd 47485/82 számú közzétett japán szabadalmi bejelentés; FERM BP-130; ATCC 21705). Ezek a GOT-aktivitással is rendelkező transzaminázok szintén alkalmazhatók önmagukban vagy kombinációban. Második transzaminázként amely amely az 4
