200342. lajstromszámú szabadalom • Enzimatikus eljárás L-2-amino-4-(hidroxi-metil-foszfinil)-vajsav előállítására

HU 200342 B

21 ' 22

Micromonospora carbonaceae (NRRL 2972) (ATCC 27114) '' ''6.1 1.4 1.6

Streptosporangjum pseudovulgare (ATCC 27100) 3.0 0.8 1.7

* Tenyésztési idő: 48 óra

VIII. táblázat

Termelt L-AMPB mennyisége (mg/ml)

Alkalmazott mikroorganizmus (Aktinomiceták)

Glu

Asp

Alá

Streptomyces viridochromogenes (JCM 4977)*

8.8

5.6

3.6

* Bialaphos-termelő antinomyceták

IX. táblázat

Termelt L-AMPB Mennyisége (mg/ml)

Alkalmazott mikroorganizmus (gombák)

Glu

Asp

Alá

Aspergillus flavus (ATCC 9643)

0.5

02

03

Aspergillus terreus (LAM QM82J)

03

0.2

0.1

Mucor spinescens (IÁM Mu3)

53

0.9

1.1

Aureobasidium puüulans (IÁM F24)

1.7

0.6

0.4

Chaetomium globosum (ATCC 6205)

03

0.1

0.2

X. Táblázat

Termelt L-AMPB

Mennyisége (mg/ml)

Alkalmazott mikroorganizmus (penészek)

Glu

Asp

Alá

Penicillium funiculosum (ATCC 9644)

0.6

0.4

03

Gliocladium virens (ATCC 9645)

2.0

0.4

03

* Tenyésztési idő: 48 óra

AII. és IV-X. táblázatban felsorolt mikroorganizmus törzsek közöl azokat, amelyek ATCC számmal vannak jelölve az American Type Culture Collection intézetnél, a JCM-számmal ellátottakat a 45 Japán Collection of Microorganism intézetnél, az IAM-számmal ellátottakat az Institute of Applied Microbiology, University of Tokyo intézetnél, és az IFO-számmal ellátottakat az Institute for Fermentation Osaka at Osaka, Japán intézetnél vannak 50 letétbe helyezve, és hozzáférhetők.

12. példa

Streptomyces hygroscopicus NP-50 törzzsel (FERMP-7804 vagy FERMBP-1368) beoltottunk 55

10 ml előtenyésztett (összetétel 2,0% oldható keményítő, 1,0% polipepton, 0,3% húskivonat, 0,05% dikálium-hidrogén-foszfát, pH = 7,0). A tenyésztést rázatás közben 28 °C-on 24 óra hosszat végeztük. A kapott tenyészettel 2% koncentrációban be- 60

oltottuk a termelő tápközeget, amely 7,0% glükózt,

3,9% búzacsírát, 25% oldható vegetatív proteint,

0,3% kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,0001% kobalt-kloridot tartalmazott, pH = 6,8. A tenyésztést 28 *C-on levegőztetés és keverés közben végeztük.

2. A fenti módon 3 napig tenyésztett tenyészet 20 ml-eihez hozzáadtunk OMPB-t és nátrium-glutamátot és nátrium-L-aszpartátot, amino-donorként olyan mennyiségben, hogy a transzaminálási reakció kezdetekor a 11. táblázatban megadott koncentrációt érjük el. 10 ml 1 mól/l-es tris-hidroklorid-puffer oldat (pH = 8,5) adagolásával a reakcióelegyek pH-ját 8,5-re állítottuk, és az elegyek térfogatát 100 ml-re egészítettük ki. így tehát az eredeti térfogatot 5-szörösére hígítottuk.

Az enzimatikus reakciót 37 °C-on enyhe rázás közben 24 óra hosszat hagytuk lefolyni. Ezután a reakeióelegyet 100 ml-es részletekben hőkezeltük a reakció leállítása céljából. A reakcióelegyből szűréssel eltávolítottuk a sejteket, és az L-AMPB mennyiségét aminosav elemzővel határoztuk meg (MLC-703 típus, ATTO Corporation gyártmány, retenciós idő 12 perc). Az eredményeket a XI. táblázatban foglaltuk össze.

65

12