200278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil gamma-interferon készítmények előállítására
3 HU 200278 B 4 jánzás elleni és immunregulátor aktivitás hasonló stabilitást mutatnak. A találmány jelentős előnye az, hogy a gamma-interferon alacsonyabb pH-értéken jobban oldódik, és ezért nagyobb koncentrá- 5 ciókban lehet előállítani, mint ahogyan azt a gamma-interferon semleges és lúgos készítményeire előzetesen ismertették. Semleges pH-értéknél a > 0,2 mg GIF/ml oldat kiválást mutat, mig a találmány szerinti készítené- 10 nyékben a gamma-interferon a tiszta, elkészített oldatban 10 mg/ml koncentrációig lehet jelen. A jelen találmány egy másik előnye, hogy a készítmény savas pH-értéke lehetővé 15 teszi az alfa- és/vagy béta-interferon - amelyek mindegyike saválló savas protein - kombinálását gamma-interferonnal ugyanabban a készítményben. A találmány egy további előnye, hogy 20 lényegesen csökkenthető vagy kiküszöbölhető a só (például nátrium-klorid) nagy koncentrációja, amit mint stabilizátort gyakran adnak gamma-interferon oldatokhoz. Ha alacsony sótartalmú gamma-interferon oldatot 25 liofilizálunk, akkor a találmány szerinti dózisformák elkészítésénél lényegesen jobb liofilizált port kapunk, mint a nagyobb sótartalmú oldatokból. Az ilyen kis sótartalmú készítmények vízben feloldva intramuszkulá- 30 ris injekcióhoz megfelelő izotóniás oldatokat adnak. A találmány szerinti liofilizált készítményekben pufferanyagok vannak jelen, úgy, hogy az elkészített oldat pH-értéke 4,0-6,0, 35 előnyösen 4,5-5,0. Az előnyös pufferrendszer citromsav és dinátrium-hidrogén-foszfát, de más szerves sav pufferok, így borostyánkősav vagy borkősav és/vagy szervetlen sav pufferok, igy bórsav vagy egy több nátri- 40 um-foszfát is használható. A találmány szerinti készítmény előnyösen tartalmaz egy szolubilizáló szert, például humán szérumalbumint (HSA), zselatint vagy kazeint. A humán szérum-albumin az elkészí- 45 tett oldat 1 ml-ében 30 mg-ig lehet jelen, előnyösen 1 mg/ml. Az antioxidánsok, ha jelen vannak, például szulfhidril-jellegű redukálószerek, igy a glutation, tiodiklikolsav, ditiotreit és 2-mer- 50 kapto-etanol vagy az aszkorbinsavnak és a ciszteinnek vagy egy gyógyszerészetileg elfogadható sójának a kombinációja. Előnyös antioxidáns az aszkorbinsav és a cisztein-hidroklorid-monohidrát kombinációja. Oxidál- 55 ható ciszteinektól mentes GIF-analógokhoz (például GIF-D) antioxidánsra nincs szükség. Az antioxidáns az elkészített oldatban előnyösen 0,1-5 mg/ml mennyiségben van jelen. Abból a célból, hogy elfogadható liofili- 60 zált masszát képezzünk és annak újbóli szolubilizálását a legjobban tudjuk elvégezni, egy vagy több töltőanyagot, így semleges aminosavakat, például glicint, alanint, monoszacharidokat, például glükózt, diszacharido- 65 kát, például laktózt és polihidroxi-cukoralkoholokat, például mannitot adhatunk az elkészített oldathoz 0-100 mg/ml, előnyösen 10- -30 mg/ml mennyiségben. Az előnyös töltőanyag a glicin. A szakember tetszés szerint más segédanyagokat is adhat a készítményekhez, például kelátképző szereket, igy etilén-diamin-tetraecetsav-dinátriumot, az elkészített oldatra 0-0,5 mg/ml mennyiségben. A fent említett szolubilizáló, antioxidáns és töltőanyagok csupán előnyös adalékai a találmány szerinti gamma-interferon készítményeknek. Bármelyik vagy az összes ilyen szer alkalmazása önmagában vagy kombinációban nem szükséges ahhoz, hogy a találmány előnyei érvényesüljenek. A találmány szerinti liofilizált porok feloldásához alkalmas oldószerek például a viz, izotóniás viz és a dextrózt, glükózt, propilénglikolt és/vagy polietilénglikolt tartalmazó (oldatok. Ha az elkészített oldatot nem injekciós célra haszáljuk (például helyi és orális alkalmazása szolgáló oldatok), akkor más, gyógyszerészetileg elfogadható oldószereket, igy etanolt is alkalmazhatunk. A találmány szerinti liofilizált por feloldásához előnyös oldószer a viz. A találmány egy másik jellemzője a gamma-interferon savas kész oldatainak a fagyasztási-olvasztási stabilitása. A .kész oldat" kifejezés olyan vizes oldatokra vonatkozik, amelyek gamma-interferon-tartalma 1-15, előnyösen 1-10 mg/ml és antioxidáns-, igy ciszteintartalma 0-5 mg/ml és amelyek nem liofilizált gamma-interferonból készültek. Ha olyan semleges kész oldatokat fagyasztunk és olvasztunk, amelyek gamma-interferon-tartalma maximum 1 mg/ml, bőséges csapadék jelenik meg. Meglepő módon azt találtuk azonban, hogy egy 4,5-5,5, előnyösen 5 pH-értékü, 8 mg/ml tartalmú kész gamma-interferon-oldat felolvasztásakor nem mutat csapadékot, még hosszabb tárolás után sem, ha az oldatot annak dermedéspontján vagy az alatt tároljuk (például -10 °C-on vagy ez alatt; -20 °C a konvencionális hőmérséklet, amelynél a stabilitást vizsgálják.) A kész oldatok pufferei ugyanazok, mint amelyeket a liofilizált készítményeknél már említettünk. Egy ilyen 5 pH-értékű kész oldat összetétele például a következő: Komponensek Koncentráció, mg/ml gamma-interferon 2,0 citromsavanhidrid 1,5 dinátrium-hidrogén-foszfát, vízmentes 1,8 cisztein-HCl--monohidrát 1,0 0,1 n nátrium-hidroxid, elegendő 5 pH-hoz A gamma-interferon tárolásához fagyasztott savas kész oldatok alkalmazása több
