200203. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,2-dehidro-szteroidok előállítására mikrobiológiai úton
HU 200203 B napig rázatjuk. Ezután a tenyészeteket egyesítjük és a fennen tlevet háromszor 200 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos ex traktumokat egyesítés után vákuumban bepároljuk, majd a nyersterméket vékonyrétegkromatográfiás módszerrel [kifejlesztőszer: n-heptán:etil-acetát (1:1) elegy] tisztítjuk. Az így nyert 750 mg 22-hidroxi-23.24-dinor-l,4,9(11)kolatrién-3-ont metanolból kristályosítjuk áL Op.: 192-196 *C. Ultraibolya színkép (etanol): \m*x 239 nm. Infiavörös színkép (KBr): vOH 3439, vOO 1666, vC=C 1622,1605 cm'1. !H-NMR spektrum: (CDCb 8): 7,15 (H-l), 6,2 (H-2), 6,05 (H-4), AMXm (Ju= 10Hz, J2,4= 2Hz, Jl,4~0Hz), 5,45 m (H-l 1), 3,45 ABXm (2H-22), 1,35 s (3H-19), 1,05 d (3H-21), 0,7 S (3H-18) ppm. Tbmegspektrum: Molekula-ion: 326. Jellemző ionok (m/z): 326,121,107,105,93,91, 55,41. A fermentáció kiindulási anyagául használt 22- hklroxi-23,24-dinor4,9(l l)-koladiéf»-3-ont az alábbi módon állíthatjuk elő: 3 g 9 a,22-dihidroxi-23,24-dinor-4-kolén-3-ont feloldunk 10 ml absz. piridinben majd hozzáadunk 3 ml ecetsavanhidridet. Az elegyet 3 órán keresztül hagyjuk szobahőmérsékleten állni, majd 100 ml vízre öntjük és extraháljuk háromszor 50 ml etil-acetáttal. Az etil-acetátos extraktumot egyesítés után vákuumban bepároljuk. Az így nyert terméket Ketonból átkristályosítva 2,6 g 9a-hidroxi-22-acetoxi-23,24- dinor-4-kolén-3-onhoz jutunk. Op.: 150-153 *C. Ultraibolya színkép (etanol): X«nu 242 nm. Infravörös színkép (KBr): vOH 3481, vC=0 1734 (acetát), vC=01659 (3-as keton), vC-C 1620 cm*1. ‘H-NMR spektrum: (CDCb 5): 5$ s (H-4), 3,9 ABXm (2H-22), 2,1 s (3H-acetát), 135 s(3H-19), 1,05 d (3H-21), 0,78 s (3H-18) ppm. 23 g 9a-hidroxi-22-acetoxi-23^4-dinor-4-kolén- 3-ont feloldunk 30 ml diklór-metánban és az oldatot -10 'C-ia hűtjük. Majd keverés közben 13 ml klórszulfonsavat csepegtetünk az oldathoz és a keverést 30 percen át folytatjuk -10 'C-on. Ezután 20 ml vizet adunk a reakcióelegyhez, majd a fázisokat szétválasztjuk. A vizes fázist kétszer 10 ml diklór-fnetánnal extraháljuk, a diklór-metános extraktumokat egyesítjük és vákuumban bepároljuk. Abepárlási maradékot vékonyrétegkromatográfiás módszerrel [kifejlesztőszer. n-heptán:etil-acetát (6:4) elegy] tisztítjuk. A kromatográfiásan tiszta terméket metanolból kristályosítjuk át. így 1,9 g 22-acetoxi-23,24-dinor- 4,9(1 l>koladién-3-onho jutunk. Op.: 89-91 *C. Ultraibolya színkép (etanol): X<nu 238 nm. Infravörös színkép (KBr): vC=0 1742 (acetát), vC=01659 (3-as keton), vO*C 1610 cm*1. ‘H-NMR spektrum: (CDCb 8): 5,75 s (H-4), 5,45 m (H-ll), 3$ ABXm (2H-22), 2,05 s (3H-acetát), 135 s (3H-19), 1,0 d (3H-21), 0,7 s (3H-18) ppm. 13 g 22-acetoxi-2334-dinor43(ll)-koladién-3- ont feküdünk 10 ml etilalkoholban és az oldathoz 5 ml 2 n etilalkoholos kálium-hidroxidot adunk. A reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten kevertetjük, majd vákuumban epároljuk. A nyersterméket vékonyrétegkromatográfiás módszerrel (kifejtesz tő11 szer. n-heptán:etil-acetát (6:4) elegy] tisztítjuk. A kromatográfiásan tiszta terméket metanolból kristályosítjuk át így 13 g 22-hidroxi-23,24-dinor- 4,9(1 lj-koladién-3-ont kapunk. Op.: 160-165 *C. Ultraibolya színkép (etanol): A<nu 236 nm. Infravörös színkép (KBr): vOH 3466, vC=01664 (3-as keton), vC=C 1614 cm*1. ‘H-NMR spektrum: (CDCb 5): 5,7 s (H-4), 5,45 m (H-ll), 132s(3H-19), 1,0 d(3H-21), 0,65 s (SHIS) ppm. 7. példa Az 1. példában leüt módon eljárva 4-androsztén-3.17- dionnal indukált Arthrobacter simplex tenyészetet készítünk. E tenyészet 10-10 ml-ét stellten 10 db 500 ml-es Erienmeyer lombikba mérjük, és 90-90 ml 1,8-1,8 g Amberlite XAD-2 adszorpciós gyantát tartalmazó steril vízzel kiegészítjük. A kapott tenyészetekhez 2 ml etilalkoholban oldott 100 mg 27-nor- 4,9(ll)-kolesztadién-3,24-diont adagolunk lombikonként. A tenyészeteket 37 *C-on síkrázógépen két napig rázatjuk. Ezután a tenyészeteket egyesítjük és a fennen tlevet háromszor 200 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumokat egyesítés után vákuumban bepároljuk. Az így kapott 12 g nyersterméket vékonyrétegkromatográfiás módszerrel [kifejlesztőszer. N-heptán:etil-acetát (1:1) elegy] tisztítjuk. A kromatográfiásan tiszta 27-nor-l,4,9(1 l)-kolesztatrién-3,24-diont metanolból átkristályosítva 580 mg termékhez jutunk. Op.: 118-120 *C. Ultraibolya színkép (etanol): Xnux 239 nm. Infravörös színkép (KBr): vC=0 1718 (24-es ketjm), vC=0 1657 (3-as keton), vC=C 1620,1600 cm* ’ *H-NMR spektrum: (CDCb 6): 72 (H-l), 6,25 (H-2), 6,0 (H4), AMXm (Ji^lOHz, J2,4=2Hz, Jl,4~0Hz), 5,45 m (H-ll), 135 s (3H-19), 1,05 t (3H-26), 038 d (3H-21), 0,65 s (3H-18) ppm. Tömegspektrum: Molekulaion: 380. Jellemző ionok (m/z): 380, 365, 265, 253, 225, 212,121,57. 8. példa Az 1. példában teírt módon eljárva 4-androsztén-3.17- dionnal indukált Arthrobacter simplex tenyészetet készítünk. E tenyészet 10-10 ml-ét sterilen 10 db 500ml-es Erienmeyer lombikba mérjük, és 90-90 ml 13-13 g Amberlite XAD-2 adszorpciós gyantát tartalmazó steril vízzel egészítjük ki. A kapott tenyészetekhez 2 ml etilalkoholban oldott 100 mg 26/27-dinor43(l l)-kolesztadién-3,24-diont adagolun lombikonként A tenyészeteket 37 "C-on síkrázógépen két napig rázatjuk. Ezután a tenyészeteket egyesítjük, és a fennen tlevet háromszor 200 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos extraktumokat egyesítés után vákuumban bepároljuk. így 950 mg nyersterméket kapunk, melyet vékonyrétegkromatográfiás módszerrel [kifejlesztőszer: n-heptán:etil-acetát (1:1) elegy] tisztítunk. Akromtográfiásan egységes 26,27- dinor-1,4,9( 11 )-kolesztatrién-3,24-diont metanolból átkristályosítva 620 mg termékhez jutunk. Op.: 130-132 *C. Ultraibolya színkép (etanol): X*n*x 239 nm. 12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
