200203. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,2-dehidro-szteroidok előállítására mikrobiológiai úton

HU 200203 B 23.24- dinor-4,9(ll),17(20)-kolatrién-22-savat 9a­­hidroxi-3-oxo-23 ,24-dinor-4,17(20)-koladién-22-sav bői például az alábbi módon állíthatjuk elő: 2 g 9a-hidroxi-3-oxo-23j24-dinor-4,17(20)-kola­­dién-22-savat feloldunk 20 ml diklór-metánban és az oldathoz -5 C-on, keverés közben 1,2 ml kiór-szul­­fonsavat csepegtetünk, majd az oldatot 30 percig a fenti hőmérsékleten kevertetjük. Ezután 25 ml vizet adagolunk a reakcióelegyhez keverés közben, majd a fázisokat szétválasztjuk, a vizes fázist kétszer 10 ml diklór-metánnal extraháljuk. Ezután a diklór-metá­­nos kivonatokat egyesítjük és vákuumban bepárol­juk. A 2,05 g bepárlási maradékot preparatív vékony­­rétegkromatográfiával [kifejlesztőszer: benzol: ace­­ton (8:2) elegy] tisztítjuk. A kapott kromatográfiásan egységes terméket 30 ml metanolban oldjuk és 2 ml 10%-os metanolos sósavat adunk hozzá, ezután a megasavanyított metanolos oldatot 120 ml etil-ace­­táttal hígítjuk és a nyert elegyet kétszer 25 ml vízzel mossuk, majd vákuumban bepároljuk. Az így kapott 1,6 g 3-oxo-23,24-dinor-4,9(11), 17(20)-kolatrién- 22-savat metanolból kristályosítjuk áL Op.: 238-239 *C. Ultraibolya színkép (etanol): Xmu 236 nm. Infravörös színkép (KBr): vOH 3400-2400, vC=0 1675 (COOH és 3-as keton), vC=C 1610 cm-1. ’H-NMR spektrum: (CDCb 5): 5,7 s (H-4), 5,5 m (H-ll), 2,0 s (3H-21), U s (3H-19), 0,9 s (3H-18) ppm. Tömegspektrum: Molekulaion: 340. Jellemző ionok (m/z): 340, 325, 307, 295, 227, 213,105,91. 4. példa Az 1. példában leírt módon eljárva 4-androsztén-3,17-dionnal indukált Arthrobacter simplex [NCAIM B(P) 000066] tenyészetet készítünk. E tenyészet 10- 10 ml-ét sterilen 5 db Erlenmeyer lombikba májük, és 90-90 ml 1,8-1,8 g Amberlite XAD-2 gyantát tar­talmazó steril vízzel hígítjuk. A kapott tenyészetek­hez 2 ml etanolban oldott 100 mg 3-oxo-23,24-dinor- 4,9( 11 )-koladién-22-sav metilésztert adagolunk lom­­bikonként A tenyészeteket 37 *C-on, síkrázógépen, két napig rázatjuk. Ezután a tenyészeteket egyesítjük, és a fermentlét kétszer 100 ml etil-acetáttal extrahál­juk. Az etil-acetátos kivonatokat egyesítjük, vízmen­tes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vákuumban be­pároljuk. A kapott nyersterméket preparatív vékony­rétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk [kifejlesz­tőszen benzokaceton (8:2) elegy]. így 370 mg kro­matográfiásan egységes 3-oxo-23,24-dinor- 1,4,9(1 l>kolatrién-22-sav metilésztert kapunk. Op.: 174-176 'C. Ultraibolya színkép (etanol): Xmu 238 nm. Infravörös színkép (KBr): vC=0 1738 (észter), vOO 1661 (3-as keton), vC=C 1626,1603 cm1. *H-NMR spektrum: (CDCb 8): 7,15 (H-l), 62 (H-2), 6,0 (H-4), AMXm (1\2= 10Hz, J2,4= 2Hz, Jl,4~OHz), 5,4 m (H-ll), 135s(3H-19), l,15d(3H- 21), 0,7 s (3H-18) ppm. Tömegspektrum: Molekula-ion: 354. Jellemző ionok (m/z): 345,339,121,93,91,59. Afermentáció kiindulási anyagául használt 3-oxo-23.24- dinor-4,9( 1 l)-koladién-22-sav-metilésztcrt a 9 2. példában lefrt módon készített 3-oxo-23,24-dinor- 4,9(ll)-koladién-22-savból diazometános észtere­­zéssel állítottuk elő. Op.: 194-200 *C. Ultraibolya színkép (etanol): Xmu 238 nm. infravörös színkép (KBr): vC=0 1735 (észter), vC=0 1670 (3-as keton), vC=C 1618 cm*1. ‘H-NMR spektrum: (CDCI3 8): 5,7 s (H-4), 5,4 m (H-ll), 135 s (3H-19), 1,18 d (3H-21), 0,7 s (SH­IS) ppm. 5. példa Az 1. példában leüt módon eljárva 4-androsztén-3.17- dionnal indukált Arthrobacter simplex (MNG 66) tenyészetet készítünk. E tenyészet 10-10 ml-ét sterilen 5 db Erlenmeyer lombikba mérjük, és 90-90 ml 13-13 g Amberlite XAD-2 gyantát tartalmazó steril vízzel hígítjuk. A kapott tenyészetekhez 2 ml etanolban oldott 100 mg 3-oxo-23,24-dinor- 4,9(11), 17(20)-kolatrién-22-sav-metilésztert adago­lunk lombikonként. A tenyészeteket 37 'C-on, síkrá­zógépen, két napig rázatjuk. Ezután a tenyészeteket egyesítjük, és a fermentlét kétszer 100 ml etil-acetát­tal extraháljuk. Az etil-acetátos kivonatokat egyesítés után vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd vá­kuumban bepároljuk. A kapott nyersterméket prepa­ratív vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztít­juk [kifejlesztőszer benzol:aceton (8:2) elegy]. így 405 mg kromatográfiásan egységes 3-oxo-23,24-di­­nor-1,4,9( 11), 17(20)-kolatetráén-22-sav-metilésztert kapunk. Op.: 130 *C. Ultraibolya színkép (etanol): Xmu 235 nm. Infravörös színkép (KBr): vC=0 1710 (észter), 1670 (3-as keton), vC=C 1625,1605 cm*1. ^-NMR spektrum: (CDCb 8): 7 2 (H-l), 6 2 (H- 2), 6,05 (H-4), AMXm (Ji^=10Hz, J2.4=2Hz, Jl,4~0Hz). 53 m (H-ll), 3,7 s (OCH3), 1,9 s (3H-21), 1,4 s (3H-19), 0,95 s (3H-18) ppm. Tömegpsektrum: Molekula-ion: 352. Jellemző ionok (m/z): 352, 337, 324, 321, 305, 293,211,147. Afermentáció kiindulási anyagául használt 3-oxo-23.24- dinor-4,9(ll),17(20)-kolatrién-22-sav-metilész tat a 3. példában leírt módon készített 3-oxo-23,24- dinor-4,9( 11); 17(20)-kolatrién-22-savból állítottuk elő diazometános észterezéssel. Op.: 143 *C. Ultraibolya színkép (etanol): Xmu 237 nm. Infravörös színkép (KBr): vC=0 1705 (észter), vC=0 1670 (3-as keton), vC=C 1630,1610 cm'1. *H-NMR spektrum: (CDCb 8): 5,7 s(H-4), 5,45 m (H-l 1), 3,65 s (OCH3), 13 s (3H-21), 135 s (3H- 19), 0,9 s (3H-18) ppm. 6. példa Az 1. példában lefrt módon eljárva 4-androsztén-3.17- dionnal indukált Arthrobacter simplex tenyésze­tet készítünk. E tenyészet 10-10 ml-ét sterilen 10 db 500 ml-es Erlenmeyer lombikba mérjük, és 90-90 ml 1,8-13 g Amberlite XAD-2 adszorpció gyantát tar­talmazó steril vízzel egészítjük ki. A kapott tenyésze­tekhez 2 ml etilalkoholban oldott 100 mg 22-hidroxi-23.24- dinor-4,9(l l)-koladién-3-ont adagolunk lom­bikonként a tenyészeteket 37 *C-on síkrázógépen 2 10 6

Next

/
  • Elrendezés
  • Igazítás
  • Forgatás
Oldalképek
Tartalom