200181. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kéntartalmú triciklikus laktámok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200181 B sére szokásosan alkalmazott eljárással határoztunk meg. Ez az eljárás az ACE és a szubsztrát/termék egyensúly előtti kölcsönhatásának követésére egy folyamatos, spektrofotometriás módszert alkalmaz, melyet Holmquist és munkatársai [Analytical Biochemistry. 95, (1979), 540-548. Az ImM 2-furán-akriloil-L-Phe-Gly-Gly szubsztrátot és az inhibitort a jelzett koncentrációban 2 ml puffer-oldatban egy Cary 210 típusú spektrofotométer kamrába helyeztünk, és hőmérsékletét 25 *C-ra állítottuk be. A hőmérsékleti egyensúly elérése után a vizsgált elegyet nyúlnyelvből nyert ACE-vel egészítettük lti, majd a reakció lefolyását számítógéppel követtük és rögzítettük. A vizsgálathoz pozitív kontroli-anyagként captoprilt (jól ismert ACE-inhibitor) alkalmaztunk. Az, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyület jelenlétében a reakció során lényegesen kevesebb törnék képződik, azt mutatja, hogy ez a vegyület ACE inhibitorként eredményesen használható, amint az az I. táblázat adataiból kitűnik. I. TÁBLÁZAT 9 Inhibitor koncentráció Időtartam Végtermék koncentráció Captoril, 10 nM 8 perc 160 nM (pozitív kontroll) 1. vegyület*, 10 nM 8 perc 95 nM 1. vegyület, 5 nM 8 perc 148 nM Az 1. vegyület [4S-(4a,7a,12bß]- 1,2,3,4,6,7,8,12b-oktahidro-7-(merkapto-metil)-6-ox o-pirido[2,l-a][2]benzazepin-4-karbonsav, vagyis olyan (I) általános képlet vegyület, melyben mind, mind R’ jelentése hidrogénatom. A magasvérnyomás kezelése során a betegnek beadandó hatóanyag mennyisége széles határok között változhat olyan tényezők függvényében, mint például az alkalmazott egységdózis, a kezelés időtartama, a kezelt beteg kora és neme, valamint a kezelt rendellenesség természete és mértéke. A beadandó hatóanyag teljes mennyisége körülbelül 0,1 mg/kg-tól körülbelül 100 mg/kg-ig, előnyösen 03 mg/kg-tól 30 mg/kg-ig terjed. Az egységdózis 25-525 mg hatóanyagot tartalmaz, és naponta egyszer vagy többször adható be. Az (I) általános képletű vegyületet beadhatjuk valamely gyógyászati hordozóanyaggal együtt, hagyományos egységdózis fonnák alakjában orálisan, parenterálisan, helyileg stb., amint azt az alábbiakban leírjuk. Akészítmény tartalmazhatja a találmány szerinti eljárással előállított vegyületet önmagában vagy más vérnyomáscsökkentő szerrel és/vagy vizelethajtó és/vagy a kalcium beépülését gátló szerekkel együtt Á találmány szerinti eljárással előállított vegyületek beadhatók például olyan vegyietekkel együtt, mint a benztiazid, clonidin, deserpidin, furosemid, hidralazin-hidroklorid, indacrinon és enantomerjei különböző arányokban, továbbá ezen vegyületek keverékei és különböző kombinációi Ezen kombinációk napi dózisai a minimálisan ajánlott klinikai dózistól az egyes vegyületek egyedi alkalmazására érvényes maximális napi mennyiségig terjedhetnek. A találmány szerinti eljárással előállított vegyieteknek a vérkeringés károsodását csökkentő képessége az úgynevezett miokardiális stunning csökkentése alapján mutatható ki. Ez a - rövid mikrokardiális iszkémiás időszakok után fellépő - jelenség abban áll, hogy a szív összehúzó ereje tartósan csirkén, azonban nekrózis (szívizom-elhalás) nem következk be Dd. E. Braunwald és R. A. Kloner, Circ. 66. 1146— 1149 (1982)]. A stunning egy sor olyan betegség és körülmény kísérő jelensége, melyek során a szív időlegesen kikapcsolódik a vérkeringésből vagy viszonylag magas koncentrációban vannak jelen oxigénből származó szabad gyökök. A stunning mérésére egy érzéstelenített kutyát felszerelünk a vérnyomást, az elektrokardiogramot (EKG), a szív összehúzó erejét, valamint a balkamrai szisztolés vérnyomást és annak deriváltját mérő műszerekkel. A baloldali szívizomba a miokardiális szegmensek rövidülésének mérésére két kristálypárt építünk be, egyiket a szívbázisnál, a másikat pedig a szívcsúcson helyezzük el. A szívcsúcsnál a kristálypárt úgy építjük be, hogy az a bal elülső leszálló koronáriás artéria (LAD, szívkoszorú-verőér) elzáródása folyamán az iszkémiás területnek egy közbenső pontján helyezkedjék el. Abázisnál a kristálypárt úgy helyezzük el, hogy az az iszkémia folyamán a normál szívizomban legyen. Egy kontroli-időszak után a LAD-ot 15 másodpercre elzárjuk, majd a vérkeringést újból megindítjuk 3 órára. A rövid ideig tartó elzárást a jelentősebb mértékű szívizom-elhalás meakadályozására alkalmazzuk. A kontroli-állatok esetében az elzárási időszak alatt a szívcsúcsi kristályok között (tehát az iszkémiás területen) elhelyezkedő miokardiális szegmens rövidülése csökken, sőt, az összehúzódás során a szegmens még nem is nyúlik, ugyanakkor a bázisnál (tehát a nem-iszkémiás miokardiumban) elhelyezett kristályok között a rövidülés megmarad. Az elzárási időszak után, mikor az iszkémiás szívizom vérellátása ismét megindul, az előbbi iszkémiás terület összehúzódó képessége javul, de a három órás újrakeringetési időszak alatt nem áll helyre teljes mértékben. Az összehúzó képességnek ezt (a százalékos rövidülés alakjában kifejezett) eltérésiét nevezzük stunningnak, ez látható az 1. Táblázaton. Hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületnek a stunningra gyakorolt esetleges inotrop (az izomösszehúzódás erejét befolyásoló) hatását kiküszöböljük, a LAD elzárása előtt a vegyület pozitív inotrop hatását legalább 80%-ban szétoszlattuk. Vérkeringési károsodás (iszkémia) kezelésére az (I) általános képletű vegyületet tartalmazó készítményt a legjobb akkor beadni a betegnek, amikor a szövet vérellátása újból megindul, és a kezelést addig az időpontig folytatni, amikor az adott típusú vérkeringési sérülés kezelését általában abba szokták hagyni, vagyis, amikor a szövet vérellátásának megindulása után már körülbelül 2-3 nap eltelt. Például koronáriás trombózis esetén az (I) általános képletű vegyületet tartalmazó készítményt előnyösen egy vérrögoldó szerrel (mint például streptokinasse vagy urokinasse) egyidejűleg adjuk be a betegnek. Az (I) általános képletű vegyületet tartalmazó készítmény iszkémiát megelőző adagolása ajánlott lehet bizonyos esetekben, mikor nagy a szívroham vagy szél-10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
