199899. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 80577 jelű poliéter antibiotikum és ezt tartalmazó takarmány-kompozició előállítására
1 HU 199899 B 2 I. TÁBLÁZAT folytatása ISP N"7 G: Jó R: 90.gy.Y Am: Semmi Sp: Semmi Glükóz-Aszparagin G: Jó R: 89.p.Y Am: Jó: a fehér Sp: Semmi N°172 F: Jó R. 89.p.Y. Am: Jó: a fehér Sp: Semmi Giicerin-glicin G: Csak nyom R: - Am: — Sp: -Csapvíz agar G: Nem növkszik R: - Am: - Sp: -Élesztő-glükóz agar G: Bőséges R: 87.m.Y Am: Közepes: a fehér Sp: Semmitől l.y Br-ig Emerson agar G: Bőséges R:87.m.Y Am: Nyom: a fehér Sp: Semmitől l.y Br-ig G» Növekedés; R = Fordított (hátoldal); Am = Légmicélium; Sp = oldható pigment Morfológiai jellemzők Az A80577 tenyészet kiterjedt alapmicéliumot termel. Mérsékelten képzett lég-hifák szorosan burkolt rövid láncok csomóit termelik, Rectus- Flexibilis (RF) morfológiában elrendezve. Ez a morfológia jellemző az Actinomadura nemzetségre. A spóra alakja gömb, a spóraméret átlaga 0,8 *on, és a spóra felülete jellegzetes szemcsés megjelenéssel bír. A spóralánc lánconként 10 spóránál kevesebbet tartalmaz. Fiziológiai jellemzők A hidrolizált teljes sejtek elemzése mezo-diaminopimelinsav jelenlétét jelzi. Madurózt mutatunk ki a teljes sejt kivonatában. Galaktóz, glükóz, mannóz és ribóz szintén kimutatható. A sejtfal III. típusú és a cukor-spektrum B típusú. A galaktóz nem tipikus a B-cukorspektrum típusokra. Az A80577 a következő szénhidrátokat hasznosítja: adonit, D és L-arabinóz, cellobióz, dulcit, etanol, i-eritrit, D-fruktóz, D-galaktóz, glükóz, glicerin, glikogén, i-inozit, D-mannit, D- mannóz, D-melicitóz, D-melibióz, L-ramnóz, D- ribóz, szacharóz, D-trehalóz, D-xilóz és nátriumbutirát. A tenyészet nem képes hasznosítani az alábbiakat: cellulóz, dextrin, inulin, D-laktóz, D- rnaltóz, a-metii-D-glükozid, D-raffinóz, szalicin, szorbit, L-szorbóz és xilit. Szénhidrátokat nem tartalmazó kontroli lemezek minimális növekedést tettek csak lehetővé. Az A80577 tenyészete 15-45 °C hőmérséklettartományban nő, az optimális növekedés úgy tűnik, 30 és 37 °C hőmérséklet között van. Az A80577 4%-ig tűri az NaCl-t, katalázt termel és a nitrátokat redukálja. A keményítőt nem hidrolizálja. Az A80577 rezisztens az alábbiakra: 10 egység bacitracin, 30 pg ce falot in, 2 pg linkomicin, 15 30 35 40 45 50 55 60 65 pg oleandomicin, 10 egység penicillin G, 5 pg rifampin és 30 pg tetraciklin. Érzékeny az alábbiakra: 10 *jg gentamicin, 30 pg neomicin és 10 p g sztreptomicin, 10 pg tobramicin és 30 fig vankomicin. Az A80577 kemotaxonómia tulajdonságai és az általános tenyésztési és morfológiai jellemzői támogatják azt a beosztást, hogy ez a törzs az Aetinomadura nemzetségbe, azon belül a verucosospora fajba tartozik. Ennek megfelelően ezt a törzset Actinomadura verrocosospora A80577- ként osztályozzuk. Mint más organizmusok esetében, az A80577- et termelő Actinomadura verrucosospora NRRL 18236 tenyészet jellemzői változhatnak. A törzs rekombinánsait, mutánsait vagy variánsait kaphatjuk meg a szakterületen ismert módszerekkel. így pl. mutánsokat kaphatunk különböző ismert fizikai és kémiai mutagénekkcl, pl. ultraibolya fénnyel, röntgensugárzással, gamma sugárzással és vegyi anyagokkal, mint N-metil- N’-nitro-N-nitrozo guanidinnel végzett kezeléssel. Ennek az Actinomadura verrucosospora törzsnek az összes természetes variánsa és mutánsa, amely megőrzi az A80577 termelés jellemzőjét, része ennek a találmánynak. Az Actinomadura verrocosospora NRRL 18236 növesztésére alkalmazott tenyésztőközeg egy sor tápközeg bármelyike lehet. A termelésben való gazdaságossága, az optimális kitermelés és a termék izolálásának megkönnyítése érdekében azonban bizonyos tenyésztő tápközegek előnyösek. így pl. a nagy léptékű fermentációhoz előnyös szénhidrát-forrás a glükóz, bár a melasz, keményítő és hasonlók szintén alkalmazhatók. Előnyös nitrogénforrás az enzimmel hidrolizált kazein, bár más nitrogénforrások szintén hasznosak lehetnek. 4
