199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 0,9$ ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 2,42 g HCl-H-Pro-OBzl és 1,1 ml N-metil-morfolin 10 ml dimetil-formamidban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül - 5 #C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetát = etil-éter eleggyel kristályosítjuk. így 3,75 g Boc-Arg(Tos)-Pro-OBzl-t kapunk por alakban. VRK: Rf = 0,38 (metanol/kloroform 1:12) [a )d = — 28,7° (c = 1,2, diklór-metán). Elemanalízis a C3oH41N507S x 0,5H2O öszszegképlet alapján: számított: C: 57,68, H: 6,78, N: 11,21%, talált: C: 57,41, H: 6,58, N: 11,85%. 4) Tos-Gb-Arg(Tos)-Pro-OBzl előállítása 3,07 g NS-Tos-gamma-guanidino-butánsavat 500 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd —20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 1,13 ml N-metil-morfolint és 0,98 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével CF3COOH-H-Arg(Tos)-Pro-OBzl (előállítás: Boc-Arg(Tos)Pro-OBzl-t trifluor-ecetsawal kezelünk anizol jelenlétében) és 1,13 ml N-metil-morfolin 20 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen kromatográfiásan tisztítjuk. így 5,2 g Tos-Gbn-Arg(Tos)-Pro-OBzl-t kapunk VRK, Rf= 0,56 (metanol/kloroform 1:3). [u]d= —31,6° (c= 1,5, metanol = /diklór-metán (1:1). Elemanalízis a C37H48N8O8S2 x CH3OH x H2O összegképlet alapján: számított: C: 54,11, H: 6,41, N: 13,29%, talált: C: 54,23, H: 6,18, N: 12,98%. 5) T os-Gb-Arg(Tos)-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt c lőállítása 400 mg Tos-Gb-Arg(Tos)-Pro-OH-t (előállítása: Tos-Gb-Arg(Tos)-Pro-OBzl 10 tömeg% Pd/C jelenlétében H2 gázzal végzett katalitikus redukciójával) 10 ml tetrahidrofurán/dimetil-formamid 10:1 elegyben oldunk és 5 °C hőmérsékletre hűljük. Hozzáadunk 97,8 mg N-hidroxiszukcinimidet és 117 mg diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet 3 órán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, máj a csapadékot szűrjük. A szűrléetet szárazra pároljuk és a m. .adékot szilikagélen oszlopkromatográfíásan tisztítjuk. így 380 mg Tos-Gb-Arg(Tos)-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEl-t kapunk. VRK, Rf » 0,46 (metanol/kloroform 1:6). (a]D ■» —43,9° (c » 0,40, diklór-metán). Elemanalízis a Cj7H74N12011S2 x 2H20 ösz■zegképlet alapján: számított: C: 56,89, H: 6,53, N: 13,97%, talált: C: 56,97, H: 6,32, N: 13,97%. 6) Gb-Arg-Pro-Trp-Pgl-Lcu-QEt előállítása 370 mg Tos-Gb-Arg(Tos) Pro-frp-Pgl-Leu-OEt-t 1 ml anizol jelenlétében —10 °C hőmérsékleten egy hermetikusan zárt HF reaktorban 10 ml hidrogén-fluoridban oldunk. Az oldatot 1 órán keresztül kevertetjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláljuk, a maradékot éterrel mossuk és vízben oldjuk. Az oldatot Amberlite IRA —93 gyantával (ecetsav forma) kezeljük, majd fagyasztva szárítjuk. A kapott nyersterméket karboxi-metil-cellulóz ioncserélővel töltött 1,3 x 10 mm méretű oszlopon víz/0,4 mól/liter ammónium-acetát oldat elegyével a gradiens módszer szerint eluálva tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 230 mg Gb-Arg-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt-t kapunk ecetsavas só formájában. VRK, Rf = 0,37 (butanol/ecetsav/víz 4:1:5). (“Id = —47,8° (c = 0,8,1% ecetsav, v/v). Tömegspektrum analízis (FAB): 859 /(M + H)+/. Aminosav analízis: Pro 1,01(1), Leu 1,01(1), Trp 0,85(1), Arg 1,13(1). 2, példa Ah-Arg-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt előállítása 1) Boc-Ah-Arg(Tos)-Pro-QBzl előállítása 1,16 g N-Boc-omega-amino-kapronsavat 20 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd — 20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,55 ml N-metil-morfolint és 0,48 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 3,12 g CF3COOH-H-Arg(Tos)-Pro-OBzl és 0,55 ml N-metil-morfolin 10 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül -5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet szárazra pároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk, így 3,6 g Boc-Ah-Arg(Tos)Pro-OBzl-t kapunk üvegszerű anyag formájában. VRK, Rf = 0,49 (metanol/kloroform 1:8). [o]D= -44,1° (c= 0,77, diklór-metán). Elemanalízis a C36H52N6O8S x 0,3^0 öszszegképlet alapján: számított: C: 58,88, H: 7,22, N: 11,44%, talált: C: 58,90, H: 7,08, N: 11,59%. 2) Boc-Ah-Arg(T os)- Pro-Trp- Pgl- Leu-OEt előállítása 534 mg Boc-Ah-Arg(Tos)-Pro-OH-t (előállítás: Boc-Ah-Arg(Tos)-Pro-OBzl 10 tömeg% Pd/C jelenlétében végrehajtott katalitikus redukciójával) 10 ml tetrahidrofurán/dimetil-formamid 10:1 elegyben oldunk, majd 5 °C hőmérsékletre hűljük. A reakcióelegyet egy éjszakán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 400 mg H-Trp-Pgl-Leu-OEt 4 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet további éjszakán keresztül 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, majde vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 520 mg Boc-Ah-Arg(Tos)-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt-t kapunk. VRK, Rf - 0,45 (metanol/kloroform 1:6). ja)D - - 37,3° (c - 0,22, diklór-metán) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
