199879. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hexapeptidek és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 199879 B 2 Elemanalízis a Csé^gNjoOnS x 1,5^0 öszszcgképlet alapján: számított: C: 59,72, H: 7,25, N: 12,44%, talált: C: 59,77, H: 7,00, N: 12,53%. 3) Ah-Arg-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt előállítása 500 mg Boc-Ah-Arg(Tos)-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt-t 1 ml anizol jelenlétében -10 °C hőmérsékleten egy hermetikusan zárt HF reaktorban 100 ml hidrogén-fluoridban oldunk. Az oldatot 1 órán keresztül keverjük, majd a hidrogén-fluoridot ledesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, és vízben oldjuk. Az oldatot Amberlile IRA - 93 (ecetsavas forma) gyantával kezeljük, máj fagyasztva szárítjuk. A kapott nyersterméket karboxi-metil-celluióz ioncserélővel töltött 1,5 x 15 mm méretű oszlopon víz/0,4 mól/liter ammónium-acetát oldat elegyével a gradiens módszer szerint eluálva tisztítjuk. Fagyasztva szárítással 304 mg Ah-Arg-Pro-Trp-Pgl-Leu-OEt-t kapunk ecetsavas só formájában. VRK, Rf= 0,55 (butanol/ecetsav/víz 4:1:1). [oí)d = -45,3° (c= 0,8,1% ecetsav). Tömegspektrum analízis (FAB): 845 /(M + H)+/. Aminosav analízis: Pro 0,96(1), Leu 1,10(1), Trp 0,88(1), Arg 1,06(1). 3. példa Bz-D-Arg-Lys-Pro-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 1) Z-Tle-Leu-OEt előállítása 10.8 g Z-Tle-OH-t 120 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd —20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 4,46 ml N-metil-morfolint és 3,86 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 10 perc elteltével 7,93 g HCl-H-Leu-OEt 500 ml dimetil-formamidban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. így 14,0 g Z-Tle-Leu-OEt-t kapunk olaj formájában. VRK, Rf= 0,68 (metanol/diklór-metán 1:100). [<*)d= — 8,2° (c = 1,8, diklór-metán). Elemanalízis a C22H34N2O5 x O3H2O öszszegképlet alapján: számított: C: 64,15, H: 8 47, N: 6,80%, talált: C: 64,32, H: 8,44, N: 6,90%. 2) Z-Trp-Tle-Leu-OEt előállítása 13.9 g Z-Trp-OH-t 200 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd -20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 4,5 ml N-metil-morfolint és 3,91 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 12,6 g HCl-H-Tle-Leu-OEt (előállítás: Z-Tle-Leu-OEt Pd/C jelenlétében végzett katalitikus redukciójával) és 4,5 ml N-metil-morfolin 50 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül - 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 21,3 g Z-Trp-Tle-Leu-OEt-t kapunk amorf anyag formájában. VRK, Rf = 0,44 (metanol/diklór-metán 1:40). [ú]d= — 23,6° (c = 1, DMF). Elemanalízis a CjaH^N,^ összegképlet alapján: számított: C: 66,87, H: 7,48, N: 9,45%, talált: C: 66,74, H: 7,54, N: 9,52%. 3) Boc-Lys(Z)-Pro-OMe előállítása 3,0 g Boc-Lys(Z)-OH-t 30 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd - 20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 0,87 ml N-metil-morfolint és 0,75 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 1,3 g HCl-H-Pro-OMe és 0,87 ml N-metil-morfolin 15 ml tetrahidrofurán/dimetil-formamid 1:1 elegyben felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül — 5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 3,5 g Boc-Lys(Z)-Pro-OMe-t kapunk. VRK, Rf = 0,39 (metanol/diklór-metán 1:40). (a]o= — 38,7°(c = 1,7, diklór-metán). Elemanalízis a C25H37N3O7 x 03H2 összegképlet alapján: számított: C: 59,98, H: 7,65, N: 8,39%, talált: C: 59,85, H: 7,39, N: 8,31%. 4) Boc-D-Arg(Tos)-Lvs(Z)-Pro-OMe előállítása 4,24 g Boc-D-Arg(Tos)-OH-t 50 ml tetrahidrofuránban oldunk, majd - 20 °C hőmérsékletre hűtjük. Hozzáadunk 1,09 ml N-metil-morfolint és 0,94 ml klór-hangyasav-etilésztert, majd 5 perc elteltével 510 g CF3COOH-H-Lys(Z)-Pro-OMe (előállítás: Boc-Lys(Z)-Pro-OMe-t anizol jelenlétében trifluor-ecetsawal kezelünk) 30 ml tetrahidrofuránban felvett oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül —5 °C hőmérsékleten keverjük, majd a csapadékot szűrjük. A szűrletet bepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot vizes nátrium-karbonát oldattal, majd vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így 5,95 g Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-OMe-t kapunk. VRK, Rf= 0,17 (metanol/diklór-metán 1:40). [a ]D = - 24,2° (c = 1,3, diklór-metán). Elemanalízis a C38H55N7O10S x IH2O öszszegképlet alapján: számított: C: 55,66, H: 7,01, N: 11,%%, talált: C: 55,65, H: 6,77, N: 11,87%. 5) Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-OH előállftása 5,95 g Boc-D-Arg(Tos)-Lys(Z)-Pro-OMe-t 90 ml metanolban oldunk és hozzáadunk 30 ml In nátrium-hidroxidot. A reakcióelegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 5 °C hőmérsékletre hűtjük és 30 ml In sósavval elegyítjük. A reakcióelegyből a metanolt kidesztilláljuk, a maradékot In sósavval megsavanyítjuk, és etil-acetáttal elegyítjük. Az etil-acetátos fázist 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
