199868. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirimidin-származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 199868 B 2 dést tartalmazó mikrotenyészlemezeken határozzuk meg. Mindegyik mélyedés 104, 48 órán át inkubált SCP-sejtet tartalmaz. A teszt-vegyület dimetil-szulfoxidos oldatát 1% dimetil-szulfoxid végső koncentrációban a vírus inokulummal együtt adjuk hozzá; a vírus inokulumot olyan mennyiségben alkalmazzuk, hogy 100%-os citopatikus hatást 12 nap után idézzen elő. Az inkubálást 37 “C-on 12 napon át végezzük, majd a lemezeket fixáljuk és kristályibolyával megfestjük. A teszt-vegyülelet tartalmazó mélyedésekben a védőhatásl a csak vírust tartalmazó és a fertőzetlen mélyedésekkel való vizuális összehasonlítás alapján értékeljük. Az aktivitást (MPC) a tesztvegyület azon legkisebb koncentrációjával fejezzük ki, amely a fertőzött mélyedésekben 100%os védőhatást fejt ki. Ennél a meghatározásnál a DFAC teszt-vegyület MPC-értéke 2,5 ^mól. (B) HÍV ellen kifejtett hatás Ennél a meghatározásnál C8166 sejtekben (humán CD4 + T limfoblasztoid vonal) hidrogén-karbonát-puffert, antibiotikumot és 10% magzati szarvasmarha szérumot tartalmazó RPM1 1640 közeg felhasználásával tenyésztett HTLV-III (RF) törzset alkalmazunk. A sejtszuszpenziót a vírus TCD50 értékének tízszeresével megfertőzzük és az adszorpciót 37 °C-on 90 percen át hagyjuk kifejlődni. A sejteket tápközeggel mossuk. A tesztet 6 ml-es szövettenyészet kémcsövekben végezzük el, mindegyik kémcső 2x10s fertőzött sejtet tartalmaz, 1,5 ml közegben. A teszt-vegyületeket - oldhatóságuktól függően - vizes közegben vagy dimetil-szulfoxidban oldjuk és a teszt-vegyület 15 /il térfogatú oldatát adjuk hozzá. A tenyészeteket 5% széndioxidot tartalmazó levegőben, nedves atmoszférában 37 °C-on 72 órán át inkubáljuk. A tenyészeteket centrifugáljuk, majd a felülúszó befogásos meghatározásnak vetjük alá, amelynél vírusos fehérje 24-el szemben különleges reaktivitással rendelkező primer antiszérumot és torma peroxidáz kimutatására szolgáló rendszert alkalmazunk. A spektrofotometriásán mért színváltozást a teszt-vegyület koncentrációjának függvényében ábrázoljuk. Meghatározzuk az 50%-os védelmet előidéző koncentrációi (IC50). A fenti meghatározásnál a DFAC teszt-vegyület IC50 értéke 1 /xmól. A találmányunk tárgyát képező ejárással előállítható új pirimidin-származékokat a gyógyászatban a hatóanyagot és inert kompatibilis gyógyászati hordozóanyagokat tartalmazó készítmények alakjában alkalmazhatjuk. A készítményeket orálisan (pl. tabletták, drazsék, kemény vagy lágy zselatin kapszulák, oldatok, emulziók vagy szuszpenziók alakjában) vagy parenterálisan (pl. injekciós oldatok formájában) adagolhatjuk. Hordozóanyagként inert szervetlen vagy szerves hordozókat alkalmazhatunk. A tabletták, drazsék és keményzselalinkapszulák készítésénél hordozóanyagként pl. laktózt, kukoricakeményítőt, keményítőt vagy származékait, talkumot, sztearinsavat vagy sóit alkalmazhatunk. A lágyzselatinkapszulák hordozóanyagként pl. növényi olajokat, viaszokat, zsírokat, félszilárd vagy folyékony poliolokat stb. tartalmazhatnak. Az oldatok és szirupok előállításánál hordozóanyagként pl. vizet, poliolokat, szacharózt, invertcukrot vagy glükózt alkalmazhatunk. Az injekciós oldatok hordozóként pl. vizet, alkoholokat, poliolokat, glicerint vagy növényi olajokat tartalmazhatnak. A gyógyászati készítmények továbbá gyógyászati adjuvánsokat (pl. tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő-, emulgeáló-, édesítőszereket, színező vagy ízesítő anyagokat, az ozmózisnyomás változását előidéző sókat, bevonat anyagokat, puffereket vagy antioxidánsokat) is tartalmazhatnak. A gyógyászati készítményekhez más gyógyászati hatóanyagokat is adhatunk. A találmányunk szerinti eljárással előállítható új pirimidin-származékok dózisa az adott hatóanyag aktivitásától, a kezelendő állapottól és a beteg szükségleteitől függ és mindenkor a kezelőorvos határozza meg. Az (1) általános képletű pirimidin-származékok napi dózisa általában kb. 0,1-20 mg/kg testtömeg, előnyöen kb. 0,2 — 15 mg/kg testtömeg, különösen előnyösen kb. 0,4-10 mg/kg testtömeg. A fenti dózis-tartományok azonban csupán tájékoztató jellegűek és az alkalmazott dózis ennél kisebb vagy nagyobb is lehet. A találmányunk szerinti eljárással előállítható pirimidin-származékokat egyetlen dózisban vagy — előnyösen - a nap folyamán több részletben (pl. legfeljebb hat részletben) adagolhatjuk. Az adagolási egységek előnyösen pl. mintegy 0,5 - 300 mg, előnyösen kb. 1,0 — 300 mg, különösen előnyösen kb. 2,0 — 200 mg pirimidin-származékot tartalmazhatnak. A gyógyászati készítményeket oly módon állíthatjuk elő, hogy egy fent meghatározott pirimidin-származékot és kívánt esetben egy vagy több gyógyászatilag értékes anyagot kompatibilis gyógyászati hordozóanyagokkal és kívánt esetben gyógyászati adjuvánsokkal összekeverünk és a keveréket a kívánt adagolási formára hozzuk. A gyógyászati készítményeket önmagukban ismert módszerekkel állíthatjuk elő. Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. 1. példa a) 0,94 g l-(3’-0-acetil-5’-0-benzoil-2’-deoxi- 2’-fluor-/t-D-arabinofuranozil)-citozinnak 4,9 ml 2 mólos metanolos ammónia-oldattal képezett oldatát 2 órán át keverjük. Az oldatot szárazra pároljuk és a maradékot etil-acetálból átkristályosítjuk. 0,64 g l-(5’-0-benzoil-2-’-deoxi-2’fluor-/<-D-arabinofuranozil)-citozint kapunk, op.: 135- 140 °C. b) 0,4 g, az la) példa szerint előállított termék 5,6 ml vízmentes piridinnel képezett oldatához keverés közben 0 °C-on 0,26 g metánszulfonilkloridot csepegtetünk. A reakcióelegyet 20 órán át 0-5 °C-on keverjük, majd 0,1 ml vizet adunk hozzá. A reakcióelegyet egy órás keverés után 20 ml jegesvízbe öntjük és etil-acetállal extraháljuk. Az ctil-acetátos extraktumokat telített nátrium-5. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
