199862. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-demetoxi-antraciklin-származékok előállítására
1 HU 1W862 B 2 rubicint /(I-A) vegyület/ kapunk hidrokloridja alakjában; olvadáspontja 155 -156 °C (bomlik). 2. példa 4-demetoxi-4,-amino-4’-dezoxi-doxorubicin /(1-B) vegyület/ előállítása 0,2 g (1-A) vegyületel feloldunk 2,7 ml vízmentes metanol és 7,5 ml dioxán elegyében és az oldatot összekeverjük 0,2 ml etil-ortoformiáttal és 0,94 g bróm 10 ml metilén-dikloriddal készített oldatának 0.75 ml-ével. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk másfél órát, majd beleöntjük 40 ml dietil-éter és 20 m petroléter elegyébe. Vörös csapadék képződik, amit szűrünk és dietil-éterrel többször mosunk, amíg teljesen savmentes lesz. A csapadékot feloldjuk t> ml aceton és 6 ml 0,25 n vizes hidrogén-bromid oldat keverékében. Az oldatot szobahőmérsékleten állni hagyjuk 10 órát, majd hozzáadjuk 0,3 g nátrium-formiát 1 ml vízzel készített oldatát. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük 30 órát, hozzáadunk 6 ml vizet és az oldatot az aglikonok eltávolítására metilén-dikloriddal extraháljuk. A vizes fázishoz 5 ml 8%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldatot adunk, majd újra extraháljuk melilén-dikloriddal. A szerves extraktumokat nátrium-szulfáttal szárítjuk és csökkentett nyomáson kis térfogatúra pároljuk be. A kapott vörös oldat pH-ját vízmentes metanolos hidrogén-klorid oldattal 3,5-re állítjuk be, és feleslegben etil-étert adunk hozzá, így 0,17 g 4-demeloxi-4’-amino-4’-dezxoi-doxorubicint /(I-B) vegyület/ kapunk hidrokloprid alakjában; olvadáspontja 156— 157 °C (bomlik). B. Biológiai hatásvizsgálati példák In vitro ln vitro megvizsgáltuk az (I-A) és (I-B) vegyületek telepnövekedési gátló hatását két emberi sejtvonalon: a LOVO (vastagból adonokarcinóma) és a LOVO/DX (doxorubicinnel szemben rezisztens vastagból adonokarcinóma) sejtvonalakon. Mindkét vegyület citoloxikusabbnak bizonyult LOVO-val és LOVO/DX-szel szemben, mint az alapvegyületek, a 4’-amino-4’-dozoxidaunorubicin, illetve a 4’-amio-4’-dozoxi-doxorubicin (4 366 149 számú USA-beli szabadalmi leírás). Az adatokat az 1. táblázatmutatja. Daunorubicinnel és doxorubicinnel összehasonlítva a doxorubicin-rezisztens sejtvonallal szemben meglépően nagyobb aktivitást tapasztaltunk az (I-A) vegyület 4’-amino-4’-dezoxidaunorubicin, az (I-B) vegyület és 4’-amino-4’dezoxi-doxorubicin esetében. 3Q 1, táblázat Citotixikus hatás LOVO és LOVO/DX sejtvonalakon 4 órás kezelés A vegyület neve IDso-értékc) R.I. d) LOVO LOVO/DX Doxorubicin a) 56,5, . 2087,0 .36,90 4’-amino-4>-dezoxi-doxorubicin5) 34,6 121,6 . . 3,50 (I-B) vegyület15) 8,6 31,5 • 3,60 daunorubicin3) 42,4 2357,0 55,50 4’-amino-4’-dezoxi-daunorubicin*5) 82,5 440,0 5,30 (I-A) vegyület15) 12,5 65,6 5,24 50 a) 10 kísérlet adatai b) 3 kísérlet adatai c) ID50 - 50%-os gátló dózis; a dózis - válasz görbékből d) R.l. — rezisztencia index: a LOVO-val 55 szembeni ID50-érték és a LOVO/DX elleni ID50-érték aránya. In vivo Elvégeztük az (1-A) és (1-B) vegyületek előzetes in vivo vizsgálatát Gross disszeminált leukémiában, egereken (2. táblázat). Mindkét vegyület hatásosabbnek mutatkozott, mint az alapvegyületek. 60 3